USP22 aiRNA通过Mdm2-p53通路抑制膀胱癌耐药细胞株T24MMC的增殖.pdfVIP

第 45卷第 6期第 597页 华 中科技大学学报 (医学版) V01．45 No．6 P．597 2016年 12月 ActaMedUnivSciTeehnolHuazhong Dec． 2016 USP22aiRNA通过 Mdm2一p53通路抑制膀胱癌 耐药细胞株 T24／MMC的增殖* 吕 磊， 袁敬东△， 黄 韬 ， 吴 维， 黄遂斌 ， 章传华 武汉市第一医院泌尿外科 ，武汉 430022 摘要 ：目的 研究沉默泛素特异肽酶 22(USP22)基 因对膀胱癌 T24丝裂霉素 C(mitomycinC，MMC)耐药细胞株 (T24／MMC)生长活性的影响，并探讨其可能的作用机制。方法 采用 MTT法检测不同浓度的MMC(20、4O、80、160、 320Ⅱg／mL)对 T24和 T24／MMC细胞生长活性的影响。实时荧光定量 PCR和 Westernblot法检测人膀胱上皮永生化 细胞 SV-HUC一1细胞株、T24和 T24／MMC细胞 中USP22mRNA和蛋 白的表达水平 。采用非对称性小 RNA(aiRNA) 干扰技术沉默 USP22，MTT法和吖啶橙 ／溴化 乙啶(AO／EB)双重染色法分别检测沉默 USP22后 MMC对 T24细胞、 T24／MMC细胞生长活性和凋亡 的影响。实时荧光定量 PCR和 Westernblot法分别检测 p53和 Mdm2mRNA和蛋 白 的表达水平。结果 采用不同浓度的MMC(20、40、80、160、320t~g／mL)处理细胞 24h后，T24细胞的生长活性分别为 82．4 、68．7 、44．2 、25．4 和 4．7 ，与未经 MMC处理组比较差异均具有统计学意义 (均 P0．05)。然而，O～160 “g／mL的MMC对 T24／MMC细胞 的生长活性无 明显影响。与 sv_HUC-1细胞 比较 ，USP22在 T24及 T24／MMC细 胞中高表达，且 T24／MMC细胞中USP22表达显著高于T24细胞，差异具有统计学意义 (P0．05)。沉默 USP22后， MMC对 T24细胞的生长活性抑制作用更显著 。且当MMC浓度在 2O～160btg／mL时，沉默 USP22后 T24／MMC细胞 的生长活性也 明显受到抑制 ，其生长活性分别为 85．1 、7O．3％、63．2 和 47．8 。同时，AO／EB实验结果显示 ，沉默 USP22后给予 80 g／mL的MMC处理 24h，可诱导 T24及 T24／MMC细胞凋亡 。实时荧光定量 PCR和 Westernblot 结果进一步显示 ，转染 USP22aiRNA24h后 ，T24／MMC细胞 中p53基 因的mRNA和蛋 白表达水平上调 ，Mdm2表达 水平下调。结论 USP22aiRNA通过调控 Mdm2一p53通路增强 MMC抑制 T24细胞增殖的敏感性，同时也能够逆转 T24／MMC对 MMC的耐药 。 关键词 ：膀胱肿瘤 ； 耐药 ； 泛素特异肽酶 22； 细胞增殖 ； 基因表达调控 中图分类号 ：R737．14 DOI：10．3870／j．issn．1672—0741．2016．06．002 USP22aiRNA InhibitsProliferationofDrug-resistantBladderCancerCellLine T24／MMCthroughMdm2一p53SignalingPathway LvLei，YuanJingdong△，HuangTaoetal DepartmentofUrology，WuhanFirstHospital，Wuhan430022，China Abstract Objective ToinvestigatetheeffectofUSP22aiRNA ontheproliferationofdrug-resistantbladdercancercell lineT24／MMC，andtoe