靶向沉默HDAC6对乳鼠心房肌成纤维细胞活化增殖的作用.pdfVIP

· 356 · 安徽医科大学学报 ActaUniversitatisMedicirtalisAnhui2017Mar；52(3) 网络 出版时 间：2017—3—1318：10 网络 出版地 址：http：／／kns．cnki．net／kcms／detaiL／34．1065．R1810．022．html 靶向沉默 HDAC6对乳鼠心房肌成纤维细胞活化增殖的作用 曹 炜，石开虎，陶 辉，施 鹏 ，吴 超，宣海洋，沙纪名，占红英 摘要 目的 探究组蛋白去乙酰化酶 (HDAC6)对乳鼠心房 疾病中有着广泛表达，具有促进心肌肥大作用。而 肌成纤维细胞活化增殖的影响作用。方法 将 50只乳鼠 该实验研究的组蛋 白去乙酰化酶6(histonedeacety． (雄性)分别提取心房肌成纤维细胞，应用 Westernblot法测 1ase6，HDAC6)作为 Ⅱ型组蛋 白去乙酰化酶家族中 定HDAC6和 ．平滑肌肌动蛋白(O1．一SMA)的表达情况；运用 的一员，在纤维化疾病的发生发展中发挥重要作 qRT—PCR技术检测 HDAC6和 0一【SMAmRNA的表达情况 ； 用 J。然而有关 HDAC6对心房肌成纤维细胞中的 MTF法检测心房肌成纤维细胞的细胞增殖活性；使用 Lipo— 作用鲜有报道。该研究将通过转染 siRNA—HDAC6 fectamine 2000Reagent向心房肌成纤维细胞中转染小干扰 RNAHDAC6(siRNA—HDAC6)后观察对心房肌成纤维细胞增 对乳鼠心房肌细胞增殖活性的影响，探索心房纤维 殖的影响。结果 转染心房肌成纤维细胞 siRNA—HDAC6组 化发生的分子机制，为房颤心房纤维化的防治提供 HDAC6和仅·SMA的蛋白表达明显下降；qRT．PCR技术检测 新思路。 siRNA—HDAC6组中HDAC6和 Ot—SMA的mRNA表达明显下 1 材料与方法 降；转染 siRNA—HDAC6明显抑制心房肌成纤维细胞的增殖 活性。结论 靶向沉默HDAC6可抑制心房肌成纤维细胞活 1．1 材料 化增殖，提示其在心房纤维化中可能发挥调控作用。 1．1．1 实验动物 SPF级 SD乳 鼠(雄性)50只，1 关键词 心房肌成纤维细胞；HDAC6；Ot．SMA 周龄，(20±5)g，购 自安徽医科大学实验动物中心。 中图分类号 R541 1．1．2 药品与试剂 MTY相关试剂(美国Sigma公 文献标志码 A 文章编号 1000—1492(2017)03—0356—04 司)；脂质体 2000、TRIzol试剂 (美国 Invitrogen公 doi：10．19405／j．cnki．issnl000—1492．2017．03．011 司)；新生牛血清 (杭州四季青公司)；PrimeScriptM。 心房肌成纤维细胞增殖和以胶原纤维为主的细 RTMasterMix(日本TaKaRa公司)；HDAC6抗体 胞外基质增多，继而导致心房纤维化的发生…。组 (美 国Abcam公司)；o．【平滑肌肌动蛋 白(一smooth 蛋 白去乙酰化酶 (histonedeacetylases，HDACs)在心 muscleactin，一SMA)、13-actin(武汉博士德公司)；二 房纤维化发生发展过程中的重要作用已成为临床研 抗 (北京中杉金桥生物技术有限公司)；逆转录试剂 究热点