放射生物学—微核.pptVIP

第三节 微核的生物剂量测定 发展简史 1964年，Rugh发现在照射后小鼠的淋巴结和外周血淋巴细胞中存在核碎片（微核） Evans等将蚕豆(V／c／a o)根端细胞暴露于电离辐射，观察到辐射诱导MN形成效应，第一篇报道 1970年Boiler和Sehmid提出用本来无核的外周血嗜多染红细胞中MN发生率来作为微核试验的基本指标，全面奠定了微核的理论及应用基础。 1973年，Heddle推荐使用这种简便而快速的方法来衡量染色体损伤， 发展简史 1985年Fenech和Morley提出了胞质分裂阻滞微核法（cytokinesis-block method, CB微核法)， 1999年发布了微核法的标准《WS/T 187—1999 淋巴细胞微核估算剂量的方法》 2001年，IAEA在技术报告丛书405号《辐射剂量估算的细胞遗传学方法》中增加了CB法微核内容 微核（micronucleus, MN） 是染色体畸变在间期细胞中的一种表现形式。断裂残留的无着丝粒断片（染色体碎片）或在分裂后期落后的整条染色体，在分裂末期都不可能纳入主核。当进入下一次细胞周期的间期时，它们在细胞质内浓缩成小的核 微核的形态学特征 存在于完整的胞浆中，小于主核的1/3； 形态为圆形或椭圆形，边缘光滑； 与主核有同样结构; 嗜色性与主核一致或略浅， 不折光； 与主核完全分离，如相切，应见到各自的核膜。 微核分析方法 甲基纤维素法 抗凝血中加入0.5%甲基纤维素后37 ℃温浴30 min后经离心、涂片、染色后进行微核显微观察计数 特点：简单，迅速 不能观察分裂中期的非稳定性染色体畸变在下一分裂间期形成的微核 常规培养法 抗凝静脉血在RPMI 1640完全培养基中37 ℃培养72 h后，经离心、低渗、预固定、固定、滴片、染色等过程，进行微核显微观察计数微核的方法 简便、经济，适合基层开展，目前使用最广 胞质分裂阻滞法 该法将抗凝静脉血在RPMI 1640完全培养基中37 ℃培养72 h后，离心、低渗、预固定、固定、滴片、染色 培养进行至44 h加入松胞素B(cytochalasin-B，Cyt-B)， 优点：计数CB细胞中的微核率，提高了微核检测的灵敏度和准确性。 缺点：试剂较昂贵 淋巴细胞微核观察 淋巴细胞微核判断标准 微核直径为主核的1/20~1/3； 微核染色性质与主核一致，染色可略淡 微核与主核在同一细胞中（CB微核法中微核应与两个主核在同一细胞中）； 微核与主核不连接； 微核不折光， 淋巴细胞计数数目 甲基纤维素法 2 000个淋巴细胞 常规培养法 2 000个淋巴细胞 胞质分裂阻滞法 1 000个双核CB细胞 淋巴细胞微核率 细胞微核率（‰） 微核细胞率（‰） 淋巴细胞微核自发率 甲基纤维素法 0.1‰~0.3‰， 常规培养法 ≤5‰； 胞质分裂阻滞法 10‰—20‰， 微核的剂量-效应关系 辐射诱导的微核率和微核细胞率随剂量增高而增加 对于低LET辐射，其剂量效应关系与照射剂量范围有关， 0.5 Gy， Y ＝ a + bD， 0.5 Gy， Y ＝ a + bD + cD2； 高LET辐射 Y ＝ a + bD 优点 方法简单,分析快速,易于掌握, 有利于自动化分析,尤其在核 事故涉及的人员较多时更显 示具优越性。 缺点 不如双着丝粒体对辐射敏感、特异； 自发率高，1％－2％； 个体差异大，与年龄呈正相关， 估算剂量下限的不确定性高； 衰减速度比双着丝粒体快。 * *