用高效液相色谱法检测鸡胚组织基因组dna甲基化-动物营养学报.pdfVIP

动物营养学报２０１５，２７（１）：１７１⁃１７７ ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ ＡｎｉｍａｌＮｕｔｒｉｔｉｏｎ 　 ｄｏｉ：１０．３９６９／ ｊ．ｉｓｓｎ．１００６⁃２６７ｘ．２０１５．０１．０２１ 用高效液相色谱法检测鸡胚组织基因组 ＤＮＡ 甲基化水平变化规律 李世召　 郭　 伟　 杜　 超　 景宇飞　 刘艳利　 申　 静　 姚军虎　 杨小军∗ （西北农林科技大学动物科技学院，杨凌 ７１２１００） 摘　 要： 本试验旨在优化用于基因组ＤＮＡ 甲基化水平检测的高效液相色谱法，并初步探索鸡 胚发育过程中不同组织基因组ＤＮＡ 甲基化水平的变化规律。 首先，试验从ＤＮＡ 酶解体系和高 效液相色谱仪检测条件２ 个方面改进基因组ＤＮＡ 甲基化水平检测方法；然后，以孵化第８、１１、 １４和 １７ 天的科宝５００ 肉鸡胚胎为材料，利用改进的高效液相色谱法测定心脏、肝脏和肌肉的基 因组ＤＮＡ 甲基化水平。 结果表明：３ 种组织的基因组ＤＮＡ 甲基化水平均随胚龄增加而升高， 且鸡胚发育后期（孵化第１７ 天）肝脏的甲基化水平显著高于心脏和肌肉（Ｐ＜０．０５）；各胚龄心脏 和肌肉的基因组ＤＮＡ 甲基化水平均差异不显著（Ｐ＞０．０５）。 结果提示，优化后的高效液相色谱 法为快速、准确地获取组织基因组ＤＮＡ 甲基化水平奠定了基础；随着鸡胚发育的进行，基因组 ＤＮＡ 甲基化水平逐渐升高，且在胚胎发育后期肝脏甲基化水平较高。 关键词： 高效液相色谱；肉鸡；胚胎；ＤＮＡ 甲基化 中图分类号：Ｓ１８８　 　 　 　 文献标识码：Ａ　 　 　 　 文章编号：１００６⁃２６７Ｘ（２０１５）０１⁃０１７１⁃０７ 　 　 表观遗传学是研究在不涉及 ＤＮＡ 序列改变 将怀孕大鼠在高剂量农药中暴露一段时间后，后 的情况下，引起基因表达调控的可遗传变化的一 代成年后会出现器官损伤，而雄性子代精子出现 ［１］ ［５］ 门学科 。 表观遗传学修饰在基因的表达调控中 的异常的ＤＮＡ 甲基化模式至少可持续 ４ 代 。 具有重要作用。 ＤＮＡ 甲基化是最常见的一种表观 因此，了解鸡胚发育过程中ＤＮＡ 甲基化的变化规 遗传学修饰，可引起 ＤＮＡ 构象、染色质结构及 律，对于从胚胎期入手研究家禽表观遗传学具有 ＤＮＡ与蛋白质相互作用方式的改变，进而影响基 重要意义。 因表达。 胚胎期是表观基因组重编程的关键时 　 　 目前，用于甲基化检测的方法有亚硫酸盐修 期，易受外界环境影响。 研究表明，孕妇摄取叶酸 饰后测序［如甲基化特异性 ＰＣＲ（ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ｓｐｅ⁃ 可预防胎儿发生心血管疾病，而叶酸是一种可通 ｃｉｆｉｃ ＰＣＲ，ＭＳＰ）］、甲基敏感扩增片段多态性 过改变 ＤＮＡ 甲基化来影响基因表达的甲基供 （ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ， ［２］ 体 。 孕鼠饲粮中添加的富含甲基的营养物质， ＭＳＡＰ）、甲基化 ＤＮＡ 免疫沉淀（ｍｅｔｈｙｌａｔｅｄ ＤＮＡ 可通过改变相关基因特异位点“ＣｐＧ 岛”的甲基 ｉｍｍｕｎｏｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ，ＭｅＤＩＰ）和焦磷酸测序等。 ［３］ 化，加重后代的过敏性哮喘 。 刺鼠胚胎期饲粮 ＭＳＰ法利用亚硫酸氢盐可将未甲基化的Ｃ转化为 中的甲基供体可使胎儿相关基因启动子区域甲基 Ｕ，经ＰＣＲ扩增后又转变成Ｔ，而甲基化的Ｃ则不