不同Ca2＋养殖条件下三角帆蚌外套膜和内脏团组织细胞的钙含量及其对碳酸酐酶的影响.pdfVIP

第39卷第 1期 海 洋 渔 业 Vo1．39，No．1 2017拄 0lyl Maline Fisheries Jan．， 2017 文章编号：1004—2490(2017)01—0076—09 不同Ca2+养殖条件下三角帆蚌外套膜和 内脏 团组织细胞的钙含量及其对碳酸酐酶的影响 周子睿，施志仪，李文娟，尚 朝，尚 攀 (上海海洋大学水产与生命学院，农业部淡水水产种质资源重点实验室，上海 201306) 摘 要：为了探讨三角帆蚌(Hyriopsiscumingii)在不同钙离子浓度养殖时，内脏团和外套膜细胞对环境中钙 离子的吸收，以及细胞内钙离子浓度对碳酸酐酶的影响，本实验设定了5种钙离子的环境浓度 (0mM、0．5 mM、1．25mM、2mM、3mM)，采用流式细胞仪测定内脏团和外套膜组织细胞内钙离子含量 ，用荧光定量 PCR 检测Q一碳酸酐酶基因( )表达，并用乙酸对硝基苯酯的水解间接测定碳酸酐酶活性，以期能阐明环境中 钙浓度对组织细胞钙含量的影响，和组织细胞内不同钙含量与碳酸酐酶基因表达和酶活性之间的关系。研究 结果表明，在相同环境 的钙离子浓度下，活体三角帆蚌的内脏团细胞中钙含量显著高于外套膜细胞 (P 0．05)，并且表明从0mM到2mM浓度，内脏团和外套膜细胞内的钙含量显著上升(P0．05)，在 3mM浓度 时出现下降(P0．05)。同时，细胞内ca“含量较低时， 在内脏团和外套膜中的表达量均显著低于细胞 内Ca2含量较高组(P0．05)，但细胞内c 荧光强度为8×10时达到饱和且开始下降，而HcCA的表达在 细胞内ca“荧光强度为6×10 已经最高，并开始下降。环境钙离子浓度在0mM、0．5mM时碳酸酐酶活性显 著高于 1．25mM、2mM、3mM浓度组 (P0．05)，而且 1．25mM、2mM、3mM浓度组问无显著差异 (P 0．05)，由此发现碳酸酐酶在0．5mM钙离子浓度中活性较高但表达量却较低，而在 1．25mM和2mM浓度中 表达量高但活性较低，并且碳酸酐酶外套膜细胞酶活性在各浓度均显著高于内脏团细胞 (P0．05)。本研究 为三角帆蚌水体最适养殖钙浓度提供了重要依据。 关键词 ：三角帆蚌；外套膜 ；内脏团；钙离子 ；碳酸酐酶 中图分类号：Q782 文献标识码：A 三角帆蚌(Hyriopsiscumingii)是我国最主要 化 CO 水解为 HC％-来参与矿化过程中CaCO 的淡水珍珠培育品种之一llJ。珍珠和贝壳主要 结晶的形成，参与了贝壳珍珠层和棱柱层 的形 成分均为CaCO (占95％ 以上)，Ca¨在维持正 成 。另有一些研究表 明，碳酸酐酶能够调节贝类 常生理功能的同时也承担着珍珠和贝壳相关的 外套膜中ca 的运输 j。这些研究表明碳酸酐 生物矿化的重要作用。因此，研究育珠贝钙离子 酶既参与了调控 CaCO 结晶过程 中的HCO3-产 相关的代谢特点对珍珠养殖产业具有非常重要 生，又参与了为结晶提供钙源的运输。在对合浦 的意义。目前对于贝类生物矿化及钙离子的代 珠母贝(Pinctadaf~ata)的矿化研究中发现碳酸 谢仍是贝类育珠的研究热点。 酐酶在外套膜组织中的活性与贝壳的形成有密 碳酸酐酶在贝类中广泛存在 J，在生物矿化 切关系 。显然，碳酸酐酶研究对三角帆蚌珍珠 中发挥着重要的作用 J。碳酸酐酶主要通过催 形成有重大意义。 近年来，随着大型流式细胞仪以及