甲泼尼龙苯丁酸氮芥及二者联合对人系膜细胞增殖和细胞周期的影响.pdfVIP

· 1278 · 中国药物与临床2013年 10月第 13卷第 10期ChineseRemedies＆Clinics．October2013，Vo1．13，No．10 甲泼尼龙 苯丁酸氮芥及二者联合 对人系膜细胞增殖和细胞周期的影响 郭广庆 李荣山 赵慧霞 赵银娥 肾小球系膜细胞 (glomerularmesangialcell，MC)是反应 上清，分别加入不同浓度的苯丁酸氮芥 、甲泼尼龙，及两药联 最活跃的肾小球固有细胞，MC增殖的直接结果是细胞外基 合的不同浓度 ，继续培养 24、48h。于培养终止前4h，每孔加 质(ECM)蛋白的过度合成及肾小球硬化。系膜细胞的增殖是 入 M1Tr液 (5mgm／1)20txl，置于 37℃、体积分数为 5％CO 慢性肾脏病进展到。肾小球硬化和纤维化的关键环节．最后发 培养箱继续培养。取出96孔培养板，弃培养液，每孑L加入二 展为终末期肾功能衰竭、尿毒症。研究表明_11，甲泼尼龙和各 甲基亚砜 (DMSO)150E1，置摇床上低速振荡 5min．使结晶 种免疫抑制剂联合使用对系膜细胞的增殖起到有效的抑制 物充分溶解后．静置 10min。用酶标检测仪490nm波长处测 作用。但在临床上会出现很多不 良反应，如何能将药物的不 定吸光度 (A)值。 良反应降低，而同时发挥最大的治疗作用，是我们 目前研究 1．5 流式细胞仪测细胞周期：取对数生长期的HMC，用 RP— 的课题。甲泼尼龙作为一线药物用于原发性和继发性肾小球 MI1640培养液 (含 10％的胎牛血清)调整细胞数至 1x106／ 疾病的治疗。苯丁酸氮芥是治疗增殖性肾小球肾炎常用的免 ml，接种于l2孔培养板，每孔 1ml细胞悬液，37℃、体积分 疫抑制剂。临床研究已证实苯丁酸氮芥在增殖性肾炎的患者 数为5％CO培养箱培养24h。细胞贴壁生长呈亚融合状态， 可以取得显著疗效，且其与肾上腺皮质激素联合使用能有效 换无血清 1640培养液，培养24h，使细胞进入静止期。弃上 阻止疾病进展，改善远期预后。苯丁酸氮芥是双功能烷化剂。 清，分别加入不同浓度的苯丁酸氮芥、甲泼尼龙 ，及两药联合 为细胞周期非特异性药物 ，对细胞周期中M期及 G．期细胞 的不同浓度，继续培养24、48h。取出12孔培养板，收集培养 的作用最强，而苯丁酸氮芥是否通过非免疫抑制作用对。肾小 细胞，悬浮于4℃预冷的磷酸盐缓冲液(PBS)中，加入70％预 球系膜细胞有直接作用，需用体外实验来进一步验证。 冷的乙醇悬液固定细胞．4oC过夜。检测前．用PBS洗涤细胞 1 材料和方法 2次 ，每一样本加 10tL1IRNase．37oC孵育 15min。加入200 1．1 细胞株与试剂：人类肾小球系膜细胞(HMC)．中国协和 l碘化丙啶，避光5min，用流式细胞仪检测。 医科大学惠赠。RPMI1640培养基购 自美国Gibco公司，胎牛 1．6 观察指标 ：细胞增殖抑制率 (％)=(对照组A值．实验组 血清 (FCS)购 自杭州四季青公司。苯丁酸氮芥购 自德国赫曼 A值)，对照组A值x100％，对照组细胞增殖抑制率为0。流式 大药厂，甲泼尼龙购 自美国辉瑞公司。 细胞仪检测细胞周期的变化。 1．2 细胞培养 ：HMC复苏 ，移人到细胞培养瓶中培养，置于 1．7 统计学分析 ：本实验用 3个批次的细胞重复2次 ，实验 37℃、体积分数为5％C0：培养箱孵育。当生长至8O％贴壁 数据以互 表示，所有数据采用SPSS13．0统计软件进行分 时，传代并继续培养，传至3—4代后用于实验。 析 ．2组比较采用两独立样本t检验，多组数据采用单因素方 1．3 药物浓度选择及分组：参考2药常用人体剂量及国内外 差分析，P0．05为差异具有统计学意义。 文献，选取合适用药浓度，分为对照组、甲泼尼龙组、苯丁酸