复习 基因工程.pptVIP

* 1、基因工程也叫什么？ 2、基因工程的基本工具有哪些？ 3、限制酶的作用是什么？ 4、DNA连接酶的作用是什么? 5、DNA连接酶的种类有哪些？有什么区别？ 6、比较限制酶、DNA连接酶与DNA聚合酶的作用？ 7、常用的载体有哪些？ 8、载体必备的条件有哪些？ 限制酶所识别的序列，无论是几个碱基，大都可以找到一条中心轴线（如图），中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向、对称、重复排列的。 限制酶所识别的序列有什么特点？ 拓展引申： 中轴线 9、基因工程的基本步骤有哪些？核心是？ 10、获取目的基因的方法有哪些？ 11、基因文库、基因组文库、cDNA文库间的关系？ 12、PCR：名称? 原理？前提？条件？结果？过程？ 13、人工合成目的基因是否需要模板DNA？ 14、基因表达载体的功能？ 15、基因表达载体的组成？每种组成的位置、功能 16、为什么目的基因能与运载体结合？ 为什么目的基因能在受体细胞中表达？ 1.原核细胞和真核细胞的基因结构有何区别？ 2.基因组文库和cDNA文库分别如何构建？ 真核细胞的基因 原核细胞的基因 外显子 内含子 外显子 外显子 内含子 启动子 终止子 启动子 终止子 编码区 非编码区 非编码区 编码区 非编码区 非编码区 用适当 限制酶切割 与载体连接 导入受体菌群 提取某生物 全部DNA 许 多 DNA片段 该生物 基因组文库 与载体连接 导入受体菌群 逆转录酶 双链DNA (cDNA) 该生物 cDNA文库 9、基因工程的基本步骤有哪些？核心是？ 10、获取目的基因的方法有哪些？ 11、基因文库、基因组文库、cDNA文库间的关系？ 12、PCR：名称? 原理？前提？条件？结果？过程？ 13、人工合成目的基因是否需要模板DNA？ 14、基因表达载体的功能？ 15、基因表达载体的组成？每种组成的位置、功能 16、为什么目的基因能与运载体结合？ 为什么目的基因能在受体细胞中表达？ 目的基因与运载体的基本结构相同 1、遗传信息的传递都遵循中心法则； 2、生物界共用一套遗传密码。 知识回忆： 1、目的基因在真核细胞中能稳定遗传的关键是什么？ 2、目的基因的检测与鉴定包括哪些方面？ 3、检测目的基因是否导入受体细胞的方法有哪些？ 目的基因是否导入受体细胞 DNA分子杂交 目的基因是否转录出mRNA 目的基因是否翻译成蛋白质 分子 水平检测 分子杂交 抗原抗体杂交 个体水平 的鉴定 （抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等） 方法一：利用载体上的标记基因，在培养基中加入相应的抗生素，对重组DNA进行鉴定和筛选 方法二：用含标记的目的基因做探针，与受体的基因组进行DNA分子杂交，观察有无杂交带出现 ?能在受体细胞中进行自我复制（或与染色体DNA整合后进行同步复制），并稳定的保存　 ?有一个或多个限制酶切割位点 ?具有某些标记基因，供重组DNA的鉴定和选择　　　　 ?对受体细胞无害，且易分离 ⑤大小适宜，便于操作 4.载体应具备的条件： 在进行基因工程操作中，真正被用作载体的质粒，都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的。 5/ 3/ G—G T—C 3/ 5/ A—G C—C PCR扩增模拟过程 5/ 3/ 5/ 2/ 5/ 3/ G—G T—C 3/ 5/ A—G C—C 5/ 3/ 引物Ⅱ G—G 1、变性 5/ 3/ A—G 引物Ⅰ 5/ 3/ 5/ 2/ 90℃-95℃ 2、复性 55℃-60℃ 3、延伸 70℃-75℃ PCR扩增模拟过程 双链DNA解链成为单链DNA 引物与单链相应互补序列结合 在热稳定DNA聚合酶的作用下延伸DNA 5、归纳总结：PCR技术 全称： 原理： 前提： 条件 结果 DNA复制 一段已知目的基因的核苷酸序列 ：以_____方式扩增， 即____（n为扩增循环的次数） 指数 2n 模板DNA；DNA引物；四种脱氧核苷酸；热稳定DNA聚合酶（Taq酶） 合成引物 多聚酶链式反应 2001年1月11日，第一只转基因灵长类动物，也就 是跟人类亲缘关系最近的动物，转基因猴安迪在 美国出世，转进去得基因绿色水母荧光蛋白基因， 这个基因的产物能产生绿色荧光，因此安迪在紫 外灯下来看是全身能发出绿色荧光，这个基 因没有其他特殊功能，也没有什么危害。 1、安迪的获得，利用了什么技术？ 2、如果你是当时的科学家，说说你是如 何操作的，从而使安迪的诞生成为事实？ 思考： 一、从绿色水母中获取绿色荧光蛋白基因 二、利用绿色荧光蛋白基因构建基因表达载体 四、对绿色荧光蛋白基因进行检测和鉴定 三、将基因表达载体导入受体（安迪）细胞 2、利用绿色水母某时期的mRNA，反转录得到 3、利用PCR技术扩增 一、从绿色水母中获取绿色荧光蛋白基因 总结