第三章 酶的生物合成与发酵生产.ppt

第三章 酶的生物合成与发酵生产 酶生物合成的调节 酶发酵动力学 酶发酵生产的工艺控制 一、酶生物合成的调节 酶的生物合成 酶生物合成的调节 生物酶产量提高的策略 1、RNA的生物合成——转录 转录是以DNA为模板，以核苷三磷酸为底物，在RNA聚合酶（转录酶）的作用下，生成RNA的过程。 2、蛋白质的生物合成——翻译 翻译：以mRNA为模板，以氨基酸为底物，在核糖体上通过各种tRNA， 酶和辅助因子的作用，合成多肽的过程。 四个阶段 1、氨基酸活化生成氨酰－tRNA 2、肽链合成的起始 3、肽链的延伸 4、肽链合成的终止 （二）酶生物合成的调节 酶合成调节的类型：诱导和阻遏 1、酶合成的诱导 乳糖诱导?-半乳糖苷酶的合成 淀粉诱导a-淀粉酶的合成 2、酶合成的阻遏 酶合成的反馈阻遏作用（末端代谢物阻遏、产物阻遏作用） 酶催化作用的产物或代谢物途径的末端产物使该酶的生物合成 受阻。引起反馈阻遏的物质，称为共阻遏物（辅阻遏物）。 组氨酸对组氨酸合成途径中的10种酶的生物合成均起反馈作用 3、分解代谢物阻遏作用 葡萄糖阻遏?-半乳糖苷酶的生物合成； 果糖阻遏a-淀粉酶的生物合成 4、控制方法 条件控制 （1）添加诱导物 4类诱导物 1）酶的作用底物 2）酶作用底物的前体 3）酶的反应产物 4）底物类似物 （2）降低阻遏物浓度 分解代谢物阻遏与解除： 终产物阻遏与解除： （3）促进分泌：表面活性剂 （4）添加产酶促进剂： 遗传控制 （1）改良菌种 诱变育种、原生质体融合、杂交育种、代谢控制育种等。 （2）基因工程育种 二、酶发酵动力学 发酵动力学：主要研究在发酵过程中细胞生长速率，产物形成速率以及环境因素对速率的影响；在酶的发酵生产中,研究酶发酵动力学对于了解酶生物合成模式；发酵条件的优化控制,提高酶产量具有重要的理论指导意义。 二、酶发酵动力学 （一）细胞生长动力学 莫诺德（Monod）方程。分批培养（batch culture）中，细胞生长速率与细胞浓度成正比。 （二）基质消耗动力学 基本质量消耗表现为能量产生、细胞质量增加与产物合成。 （三）产酶动力学 1、酶生物合成模式 分批培养中，根据酶的合成与细胞生长之间的关系，酶的生物合成分为3种模式。不同模式的主要原因是酶所对应mRNA的稳定性与培养基中是否存在阻遏物。 （1）生长偶联型 又称同步生长型。细胞进入生长期，酶即开始大量合成；细胞进入平衡期后，酶的合成随之停止。其生物合成可以诱导，但不受分解代谢物阻遏和终产物阻遏。当除去诱导物或细胞进入平衡期后，酶的合成立即停止。其所对应的mRNA很不稳定。 （2）非生长偶联型 又称滞后合成型。只有当细胞生长进入平衡期后，酶才开始合成并大量积累。其生物合成受分解代谢物阻遏。该酶所对应的mRNA稳定性好。如多数水解酶类。 （3）部分生长偶联型 又称延续合成型。酶的合成与细胞同步开始，细胞生长进入平衡期后，酶还可以继续合成。其生物合成可以诱导，但不受分解代谢物阻遏和终产物阻遏。该酶所对应的mRNA很稳定。酶生产中最理想的生物合成模式。 影响酶生物合成模式的因素主要是mRNA和培养基中存在的阻遏物： mRNA稳定性高的，可以在细胞停止生长后继续合成相应的酶； mRNA稳定性差的，随着细胞生长停止而终止酶的合成；不受阻遏物阻遏的,可随着细胞生长而开始酶的合成；受阻遏物阻遏的,要在细胞生长一段时间或进入稳定期后解除阻遏,才能开始酶的合成。 在酶的工业生产中，为了提高酶产率和缩短发酵周期,最理想的酶合成模式是延续合成型；对于其它类型的酶,要在菌种选育和工艺条件上加以调节；对于同步合成型，尽量提高mRNA的稳定性，如降低发酵温度;对于滞后合成型,尽量减少阻遏物；对于中期合成型，要从提高mRNA稳定性和解除阻遏两方面进行。 三、酶发酵生产的工艺控制 根据细胞培养方式的不同，酶的发酵生产可以分为固体发酵、液体发酵、和固定化细胞发酵等方式。 三种方式不同的含义与不同的特点（P117）。 （一）酶发酵生产的工艺控制 1、酶发酵生产的一般工艺 2、发酵罐 3、培养基及培养基灭菌 （1）培养基成分 1）碳源 碳源选择应该考虑的问题 2）氮源 3）无机盐和微量元素 4）生长因子（growth factor） （2）发酵培养基配制 （3）培养基的灭菌 1）湿热灭菌 2）灭菌的要求 3）灭菌方式 酶工程的基本过程图解 3）灭菌方式 分批灭菌 又称实罐灭菌、实消。 连续灭菌 又称连消。 4 种子培养 （1）概念 （2）流程 （3）种子质量控制措施 1）培养基 营