食品中沙门氏菌的检验.docVIP

华南农业大学 食品学院 食品中沙门氏菌检验 题目: 食品中沙门氏菌检验 班级:2009级食品质量与安全5班 学生姓名: 黄远景200930610509 李安迪 200930610510 李舜 200930610511 李窕妍 200930610512 指导老师: 莫美华 日期:2011年11月16日 食品中沙门氏菌检验 摘要: 本实验以鸡肠为材料制得样品匀液,按检测规定引用标准GB4789.4-2008对其进行216个[1].。与人类疾病有关的血清型主要集中于 A~E 群，包括伤寒沙门氏菌、（甲、乙、丙型）副伤寒沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、肠炎沙门氏菌等，其中以鼠伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌及猪霍乱沙门氏菌最为常见。它不仅能导致鸡白痢、鸡伤寒、副伤寒、仔猪副伤寒等动物疾病，还能使人类发生伤寒、副伤寒、败血症、胃肠炎和食物中毒[2]。 根据国际惯例, 要求对易受沙门氏菌污染的食品进行分类管理, 以使大多数食物不含沙门氏菌, 从而有效预防沙门氏菌引发的各种疾病。20 世纪 50 年代以来, 国内外学者进行了大量的研究, 从以传统方法为基础发展到以免疫学为基础的或以分子生物学为基础的快速检测方法, 并在实践检验中不断取得新进展。这些方法包括酶联免疫吸附试验法、免疫磁珠法、免疫荧光标记法、噬菌体裂解试验法、核酸探针法等[3]。本实验采用的是传统标准检测方法，包括前增菌,选择性增菌,选择性平板分离,生化试验,血清学分型鉴定五个步骤。 材料与方法 设备和材料 1.1.1 恒温培养箱：36℃±1℃，42℃±1℃ 1.1.2 拍击式均质器。 1.1.3 电子天平：感量0.1g。 1.1.4 无菌锥型瓶：容量500ml,250ml。 1.1.5 微量移液器及吸头。 1.1.6 无菌培养皿：直径90mm。 1.1.7 无菌试管：3mm×5mm、10mm×75mm。 1.1.8 无菌毛细管。 1.1.9 三角烧瓶。 培养基和试剂 缓冲蛋白胨水（BPW）：称取蛋白胨10g，NaCl 5g，Na2HPO4`12H2O 9g，KH2 PO4 1.5g,加蒸馏水1L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三瓶，121℃，灭菌20min。 四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液：称取18.72g,加蒸馏水200ml，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装试管，每管10ml，121℃，灭菌20min，此上配制的为基础液，冷却至50℃，每100ml基础液加入碘液2ml，0.1%煌绿液1ml，混匀备用。 亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液：称取4.6g，加蒸馏水200ml，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装试管，每管10ml，无需高压灭菌，冷却至常温立即使用。 亚硫酸铋（BS）琼脂：称取39.3g，加蒸馏水950ml，搅拌加热煮沸至完全溶解，无需高压灭菌，为基础液；称取8g指示剂，加水50ml，水浴50℃左右，搅拌溶解，将50ml指示剂加入950ml已冷却到50℃的基础液，混匀后立即倾注平板。 HE（Hektoen Enteric）琼脂：称取牛肉膏5g，蛋白胨 10g，NaCl 5g，琼脂 20g，加蒸馏水1L，搅拌加热煮沸至完全溶解，无需高压灭菌，冷却到50℃，立即倾注平板。 三糖铁（TSI）琼脂： 蛋白胨水、靛基质试剂： 尿素琼脂（PH7.2）： 氰化钾（KCN）培养基及其对照氰化钾培养基： 赖氨酸脱羧酶试验培养基及其对照培养基： 甘露醇及山梨醇培养基： 邻硝基酚β-D半乳糖苷（ONPG）培养基： 1.3、检验程序[4] 1.3.1 沙门氏菌检验程序见图1. 图 1 沙门氏菌检验程序 1.3.2操作步骤 1.3.2.1培养基的配制 按照1.2的部分配制。 1.3.2.2前增菌 称取25g样品放入盛有25mlBPW的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1~2min。样品为液态，直接进行培养，于36℃±1℃培养8h~18h。 1.3.2.3选择性增菌 轻轻摇动培养过的样品混合物，移取1ml，转种于10mlTTB培养基内；于42℃±1℃,18h~24h培养。 另取1ml,转种于10mlSC内，于36℃±1℃,18h~24h培养。 1.3.2.4 选择性平板分离 分别用接种环取经TTB增菌液1环，划线接种于一个BS琼脂平板和一个HE琼脂平板。同时，另取SC增菌液1环，划线接种于一个BS琼脂平板和一个HE琼脂平板。于36℃±1℃分别培养18h~24h（HE琼脂平板）或40h~48h(BS琼脂平板)，观察各个平板上生长的菌落，各个平板上的菌落特征见表1 表 1 沙门氏菌在不同选择性琼脂平板上的菌落特征 选择