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超声波法提取西洋参茎叶中人参皂苷Re工艺优化 　　摘要：以甲醇为提取溶剂，采用超声波法从西洋参（Panax quinquefolium L.）茎叶中提取人参皂苷Re，通过高效液相色谱法测定人参皂苷Re含量，设计单因素试验和正交试验考察超声波频率、超声波时间、提取温度和料液比对人参皂苷Re含量的影响，优化提取工艺条件。结果表明，各因素对西洋参茎叶中人参皂苷Re提取率的影响由大到小依次为提取温度、料液比、超声波时间、超声波频率。优化的提取条件为超声波时间60 min、提取温度45 ℃、超声波频率45 kHz、料液比m西洋参∶V甲醇=1∶20（g/mL）。 关键词：超声波法；提取；西洋参（Panax quinquefolium L.）；人参皂苷Re；高效液相色谱 中图分类号：S567.5+3；R284.2 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）13-3137-03 西洋参（Panax quinquefolium L.）是五加科人参属多年生宿根草本植物，其根是滋补强壮的名贵中药，性寒，味甘微苦，具有补气养阴、清热生津之功效，通常用于气虚阴亏、咳喘痰血、虚热烦倦、口燥咽干等症[1]。中国从20世纪80年代开始引种西洋参，现已大规模种植并实现产业化[2]。人参皂苷（Ginsenoside）是西洋参的次级代谢产物，属于四环三萜皂苷类化合物，是其主要药效成分之一，多积累于西洋参根的韧皮部和周皮以及叶中[3]。国内外对西洋参根中人参皂苷含量及生理活性的研究很多，发现人参皂苷Re在西洋参茎叶中的含量最高，其具有抑制肿瘤细胞增殖、保护神经的作用，是西洋参的主要生物活性成分之一，与人参皂苷Rg1和Rb1等均是西洋参的定量指标[1，4-10]。超声波法具有高效、快速等优点，在天然产物有效成分的提取中被广泛应用[11，12]。本研究采用超声波法从西洋参茎叶中提取人参皂苷Re，通过高效液相色谱法（HPLC）测定其含量[13-15]，并在单因素试验的基础上采用正交试验优化提取工艺条件，以期为西洋参茎叶中人参皂苷Re的提取及利用提供参考。 1 材料与方法 1.1 材料与仪器 西洋参茎叶采自陕西省留坝县佳仕森中药综合开发有限公司西洋参种植基地，干燥后粉碎成80目的西洋参茎叶粉末备用。人参皂苷Re标准品为上海同田生物技术有限公司产品，纯度98%，批主要试剂乙腈为色谱纯，甲醇和磷酸等均为国产分析纯。主要仪器包括高效液相色谱仪（美国安捷伦1200系列）、KQ-700VDE型三频数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）等。 1.2 方法 1.2.1 超声波法提取人参皂苷Re 称取2.000 0 g干燥的西洋参茎叶粉末，置于50 mL锥形瓶中，加入80%（体积分数，下同）的甲醇20 mL，在超声波清洗器中45 kHz下提取40 min，2 000 r/min离心分离5 min，取上清液，重复提取3次，合并提取液，用80%的甲醇定容至100 mL，得人参皂苷Re提取液。 1.2.2 超声波时间的测定 精确称取人参皂苷Re标准品用80%的甲醇配制成浓度为7 mg/mL的标准品溶液，分别取5、10、15、20 μL标准品溶液，用80%的甲醇补足至20 μL作为供试液。采用高效液相色谱法对供试液进行测定。色谱条件为：ZORBAX SB-C18色谱柱（4.6 mm× 250 mm，5 μm），柱温35 ℃，检测波长203 nm，流动相为0.05%磷酸水溶液-乙腈（体积比80∶20），流速1.0 mL/min，进样量20 μL。根据供试品溶液的液相色谱图求得人参皂苷Re浓度（x//mg/mL）对其峰面积（y）的线性回归方程为y=127.11x+949.18，r=0.998 6。同法测定并计算提取液中人参皂苷Re的浓度。人参皂苷Re对照品及提取样品液的液相色谱图分别见图1和图2。 人参皂苷Re提取率=提取液中人参皂苷Re浓度×提取液体积/西洋参茎叶粉末质量×100% 1.2.3 单因素试验 设置单因素试验分别考察超声波法提取西洋参茎叶粉末中人参皂苷Re时超声波时间、提取温度、超声波频率和料液比（m西洋参∶V甲醇，g/mL，下同）对人参皂苷Re提取率的影响。①超声波时间。提取温度45 ℃、料液比1∶10、超声波频率为45 kHz，超声波时间分别为20、40、60 min。②提取温度。超声波时间40 min、料液比1∶10、超声波频率45 kHz，提取温度分别为30、45、60 ℃。③超声波频率。超声波时间40 min、提取温度45 ℃、料液比1∶10，超声波频率分别为45、80、100 kHz。④料液比。超声波时间40 min、提取温度45 ℃、超声波频率45 kHz，料液比分别为1