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辽细辛根茎试管生根苗培养探究 　　摘 要：以根茎为材料，采用组织培养的方法，对辽细辛进行了芽生长培养、生长苗分化培养、不定芽分化培养和生根培养，以及生根苗的移栽和定植的研究。结果表明：以炉灰渣为培养基支持物，1/2MS+ NAA0.1 mg·L-1+6-BA 0.8 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1是根茎生长苗培养的适宜培养基；2/3MS+蔗糖30 g·L-1+NAA0.3 mg·L-1+ ZT1.5 mg·L-1是生长苗分化培养的适宜培养基；1/2MS+蔗糖15 g·L-1+ABT2号1.0 mg·L-1+IBA0.6 mg·L-1是生根苗培养的适宜培养基；在温室中移栽于营养钵中的生根苗成活率为97.8%，移栽于苗床上的成活率为98.3%；定植成活率为99.5%。定植的生根苗保持了野生辽细辛的所有植物学性状。 关键词：辽细辛；根茎；组织培养；生根苗 中图分类号：Q813.1+2；S567.2 文献标识码：A DOI编码：10.3969/j.issn.1006-6500.2013.08.006 辽细辛（Asarum heterotropoides Fr.Schmrdt var.mandshuricum（Masim.）Kitagawa）又称北细辛、山细辛，属于马兜铃科细辛属多年生草本植物[1]，生长在腐殖质土层较厚的阴湿林下及阴山坡上，在大连地区的庄河市、瓦房店市有分布[2]。辽细辛的根茎做中草药用，具有散寒祛风、止痛、温肺化饮、通窍等功效，能治肺寒咳喘、风湿关节疼、头疼、牙疼、鼻塞、鼻渊和口疮等疾病[3-4]。将辽细辛晒干后磨成全草粉作为家禽的饲料添加剂，也能明显降低家禽的发病率。由于辽细辛对人和家禽具有多种药用价值，一直以来，人们都在大量地采挖药用，使本来分布与数量就很少的辽细辛现在在大连的庄河和瓦房店已经很难采到，几近成为濒危的野生药用植物。为保护辽细辛的野生资源，笔者以其根茎为材料，进行了试管苗培养的研究。 1 材料和方法 1.1 材 料 秋季，将在瓦房店市万家岭山坡上发现的多株辽细辛的生长位置做好标记。2009年4月中旬，待辽细辛的根茎即将萌发时将其挖回实验室，将根茎的上细长根剪掉，再把具有待萌发芽的上部剪下2.0～2.5 cm作为试验材料备用。 把剪下的具有待萌发芽的根茎上部，放到200 mL的磨口广口瓶中，参见王宇等[5]灭菌方法进行灭菌。 培养条件参见翻白草的研究[6]。 1.2 方 法 1.2.1 根茎芽的生长培养 在超净工作台上，把灭菌后的根茎下部切掉，把具有待萌发芽的上部保留0.8 cm左右，分别接种到不加支持物的液体培养基，以胨力强度240 g·cm-2的琼脂为支持物，以干净河沙为支持物和以颗粒状炉灰渣为支持物的1/2MS+ NAA0.1 mg·L-1+6-BA0.8 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1的4种培养基上，进行不同培养基支持物对根茎芽生长的影响试验。重复2次，每种处理接种培养20个材料。 1.2.2 生长苗分化培养 把生长苗从基部切下后，接种到以2/3MS+蔗糖30 g·L-1为基本培养基，附加NAA0.3 mg·L-1+KT 1.0 mg·L-1、NAA0.3 mg·L-1+ KT 1.5 mg·L-1、NAA0.3 mg·L-1+ KT 2.0 mg·L-1、NAA0.3 mg·L-1+6-BA 1.0 mg·L-1、NAA0.3 mg·L-1+6-BA1.5 mg·L-1、NAA0.3 mg·L-1+6-BA2.0 mg·L-1、NAA0.3 mg·L-1+ZT1.0 mg·L-1、NAA0.3 mg·L-1+ ZT1.5 mg·L-1、NAA0.3 mg·L-1+ ZT2.0 mg·L-1 9种培养基上，进行不同浓度的生长调节剂组合对生长苗分化的影响试验。重复2次，每种处理接种培养100个生长苗。 1.2.3 生根培养 把分化培养的2 000个高度在1.5 cm左右的不定芽从基部剪下，接种到以1/2MS+蔗糖15 g·L-1+ABT2号（2号生根粉）1.0 mg·L-1为基本培养基，附加浓度分别为0.3，0.6，0.9，1.2，1.5 mg·L-1的2，4-D、IBA、NAA和IAA 4种不同浓度生长素的培养基上，进行不同种类、不同浓度的生长素对生根苗培养的影响试验。每种处理接种培养100个不定芽。 1.2.4 生根苗移栽与定植 3月20日，把培养的510株生根苗移栽到上层为干净河沙的温室营养钵中，其余540株移栽到上层为干净河沙的温室苗床上。 5月20日把移栽成活的1 024株生根苗一次性定植于大连旅顺的上坡上。定植后除了移栽前松土和浇1次透水外，其它按照野生条件管理。 2 结果与分析