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微生物检验技术 微生物检验技术 微生物分子生物学检验技术 一、消毒与灭菌 消毒(disinfection)：杀死物体上病原微生物的方法，并不一定能杀死含芽胞的细菌或非病原微生物。用以消毒的药品称为消毒剂(disinfectant)。 灭菌(sterilization)：杀灭物体上所有微生物的方法。灭菌比消毒要求高，包括杀灭细菌芽胞在内的全部病原微生物和非病原微生物。 抑菌(bacteriostasis)：抑制体内或体外细菌的生长繁殖。常用的抑菌剂为各种抗生素。 防腐(antisepsis)：防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法。细菌一般不死亡。 无菌(asepsis)：不存在活菌。 物理消毒灭菌法 热力灭菌法 辐射杀菌法 滤过除菌法 超声波杀菌法 干燥与低温抑菌法 热力灭菌法 干热灭菌法— 焚烧：废弃物、尸体 灼烧：接种环、试管口 干烤：玻璃器皿 红外线：医疗器械 湿热灭菌法— 巴氏消毒法：61.6-62.8 ℃30min或71.7 ℃15-30s,主要用于牛乳消毒。 煮沸法 流动蒸汽消毒法 间歇蒸汽消毒法 高压蒸汽灭菌法 辐射杀菌法 紫外线 波长200-300nm的紫外线具有杀菌作用。 其主要作用于DNA，使一条DNA链上相邻的两个胸腺嘧 啶共价结合形成二聚体，导致细菌变异和死亡。 电离辐射 高速电子、X射线、γ射线 微波 波长1mm~1m 滤过除菌法 赛氏滤器 玻璃滤器 薄膜滤器 化学消毒灭菌法 消毒剂的种类：酚类、醇类、重金属盐类、氧化剂、表面活性剂、烷化剂。 消毒剂的应用：病人排泄物与分泌物、皮肤、粘膜、饮水、厕所、空气、手。 影响消毒灭菌效果的因素 消毒剂的性质、浓度与作用时间 微生物的种类与数量 温度 酸碱度 有机物 营养物质 氢离子浓度(pH) 温度 渗透压 气体——专性需氧菌：具有完善的呼吸酶系统，仅能在有氧环境下生长。 微需氧菌：在低氧压（5%-6%）生长最好。 兼性厌氧菌：兼有有氧呼吸和无氧发酵两种功能，但以有氧时 生长较好。大多数病原菌属于此。 专性厌氧菌：缺乏完善的呼吸酶系统（氧化还原电势高的呼吸 酶、分解有毒氧基团的酶），只能在无氧环境中 进行发酵。 菌种的保藏与复壮 菌种衰退的基本原因是变异，变异是不可避免的，而减缓变异速度则是可能的。 不良环境条件能促进变异，频繁或过多传代也是造成衰退变异的重要原因。 为菌种创造良好条件，减缓菌种衰退，这就是菌种保藏与复壮工作。 一、菌种保藏 微生物菌种保藏目的是要使菌种性状保持稳定,力求把这种衰退现象推迟减缓到最低限度。 菌种保藏 菌种保藏有许多的方法，其共同的目标是把菌株的性状保存下来，防止退化、死亡或杂菌污染。 保藏是将获得的纯菌种以其休眠和停止生长的条件下保藏。 微生物生长要求适宜的温度、水分、空气和营养物质等，如将菌种处于低温、干燥、无氧和缺乏营养的条件下，就可以使菌种暂时处于休眠状态。 一、菌种保藏 (一)低温保藏法 (二)低温定期移植法 (三)石蜡油低温保藏法 (四)干燥保藏 (五)甘油管保藏法 (六)真空冷冻干燥法 (七)液氮超低温保存 低温是保藏菌种的重要因素，也是常用的一种简单易行的方法。在作低温保藏时，注意尽量不损伤细胞。 在缓慢冷冻时，胞外基质一般较快结冰而形成冰晶使基质浓度增高，造成细胞水分外渗而大量脱水，可能使细胞死亡。 如快速降温，胞内也很快形成冰晶，胞内外渗透压基本平衡，同时胞内冰晶较小，对细胞及原生质膜的损伤也较小，菌株不易死亡，影响