低氧运动后不同恢复环境下大鼠腓肠肌热休克蛋白70基因表达时程变化.docVIP

低氧运动后不同恢复环境下大鼠腓肠肌热休克蛋白70基因表达时程变化 摘　要：目的：实验旨在观察低氧(氧含量12.7％，相对高度4000m)跑台运动后低氧、常氧恢复下大鼠腓肠肌热休克蛋白70(HSP70)基因表达的时程变化。方法：雄性8周龄SD大鼠48只，随机分为低氧运动后即刻组(HE)，低氧运动后低氧恢复ld组(H1)、2d组(H2)、7d组(H7)，低氧运动后常氧恢复1d组(N1)、2d组(N2)、7d组(N7)，以及常氧对照组(C)，每组6只。运动组进行低氧环境下的跑台运动，运动后将运动组大鼠分别处于低氧和常氧恢复环境，对低氧运动后即刻、低氧运动后低氧恢复及常氧氧恢复1d、2d、7d的大鼠右侧腓肠肌取材进行分析，用实时荧光定量RT-PCR法检测HSP70基因表达水平。结果：运动后即刻大鼠腓肠肌中HSP70基因表达显著高于对照组(P0.05)。低氧恢复过程中，第1d、第2d基因表达上升，且显著高于即刻组(P0.05)，第7d基因表达显著下降(P0.05)；常氧恢复过程中，第1d基因表达显著下降(P0.05)。第2d、第7d基因表达缓慢上升。结论：低氧运动后即刻诱导HSP70基因表达水平升高；低氧恢复过程中HSP70基因高水平表达维持的时间要比常氧恢复组要长。低氧恢复1d，2d组基因表达水平显著高于相应的常氧恢复组，为低氧恢复中维持高浓度蛋白水平奠定物质基础。 关键词：热休克蛋白70；实时荧光定量RT，PCR；基因表达；大鼠；腓肠肌 中图分类号：G804 2　文献标识码：A　文章编号：1007-3612(2010)04-0048-04 研究证实，热休克蛋白70(HSP70)能够抵御机体氧化应激损伤与细胞凋亡。当骨骼肌在运动、氧浓度降低、自由基产生增多等情况下会诱导HSP70表达增加。HSP70与一些基本的细胞功能密切相关，如新合成的蛋白质正确折叠到行使生物学功能的正常结构、蛋白质转运、组装、变形蛋白质的复性等。有很多研究表明运动、低氧能诱导HsP70\基因表达发生改变。高住高训、高住低训、低住高训等训练方式是当今运动生理学界研究的热点。本研究旨在观察大鼠进行低氧跑台运动后不同恢复环境下大鼠腓肠肌HSP70基因表达的时程变化，为高住高训、低住高训等低氧训练、运动的深入研究提供动物实验基础。 1　实验材料与方法 1.1　实验对象　雄性SD大鼠，8周龄，48只，体重228～253g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司。国家标准啮齿类动物饲料，分笼饲养，自由饮食、进水，室温(22±2)℃，相对湿度30％～60％，自然光照。常压低氧房氧浓度为12.7％，相对高度4000m。 1.2大鼠运动方式与分组　动物随机分为常氧对照组(c)，低氧运动后即刻组(HE)，低氧运动后低氧恢复1d组(HJ)、2d组(H2)、7d组(H7)，低氧运动后常氧恢复1d组(N1)、2d组(N2)、7d组(N7)，每组6只大鼠(n=6)。 正式实验前对所有大鼠(包括对照组C)进行为期3d的常压常氧适应性训练。第4d进行常压低氧环境下的一次性间歇跑台运动。运动组大鼠均采取间歇训练方法，运动方案如下：速度10m/min：运动5min+间歇1min；速度15m/min：运动5min+间歇1min，重复4次；速度20m/min：运动5min，坡度为10°。 1.3　大鼠腓肠肌样本的采集与处理　大鼠称重后，用2％戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，剂量每100g体重0.25mL。腹主动脉取血后，速取右侧腓肠肌，切成小块，用锡纸编号、包好，投入液氮中冰冻暂存。取材完成后把腓肠肌标本转移至-80℃冰箱保存，备用。 1.4测试指标与具体测试方法 1.4.1　大鼠腓肠肌mRNA的提取　严格按照mRNA提取试剂盒(RNeasy Fibrous Tissue Mini Kit，No.74704,OlAGEN)进行操作；提取完成后测试mRNA浓度及OD值(Eppendoff)；提取完成后进行反转录，获得cDNA模板。 1.4.2　引物设计 1.4.3　实时荧光定量RT－PCR　用96孔板(General Bioloz-ic)在荧光定量PCR仪(cHROMO 4Tm，Continuous Fluores.cence Detector)中进行扩增定量。采用20uL的反应体系，包含：10×Buffer for DNA P01.2uL，2.5mM dNTP(上海申能博彩生物科技有限公司)2uL，eDNA模板2uL，上游和下游引物各1uL，SYBR Green I荧光染料(sYBl，Biorad)0.5uL，TaqDNA Polymerase(上海申能博彩生物科技有限公司)0.3gL，双蒸水11.2uL。用荧光信号读取软件(Optic.