疟原虫血片制作及染色.ppt

血膜制作 血膜染色 影响染色效果的因素 血膜制作（取血时间） 间日疟 前驱期相当于肝内期疟原虫发育，因原虫密度太低， 镜检多为阴性。 发冷（寒战）期相当于红内期成熟裂殖体涨破 红细胞期，镜检多为裂殖体和环状体。 发热期外周血中以环状体（小滋养体）为主，也可见到裂殖 体； 出汗期因原虫密度太低，镜检多为阴性。 发作后数小时，间歇期外周血中以大滋养体为主，形态较易辩认，为诊断的有 利时机； 发作36-48h，可检出裂殖体； 发作1-2次后，配子体出 现较多。 血膜制作（取血时间） 恶性疟较理想的取血时间是在发作后至 20h内取血，发作后2小时左右，此时环状体发育至最高峰，初发患者退热后常查不到原虫。末梢血血检到恶性疟原虫配子体，是在末梢血出现环状 体之后的7-10天。 血膜制作（工具准备） 一次性采血针、75%酒精、棉棒（球）,载玻片，推片，记号笔或铅笔。 厚、薄血膜的位置 每张载玻片上可做1个薄血膜和1个厚血膜，如图 血膜制作的注意事项 1. 玻片清洗时，避免玻片碰撞、磨损。制作血膜的载玻片必须完全清洁而毫无油渍或污垢。制片时，手指只能持载片的边缘，不能接触玻片表面，以免油污使薄血膜产生空白区以及厚血膜脱落。作为推片的玻片边缘一定要平滑，才能使推出的血膜均匀一致。 血膜染色（二）染色的原理 伊红主要离解为酸性的阳离子，在遇到碱性的蛋白质如血红蛋白、嗜伊红白血球颗粒等即可结合成不易溶于水的沈淀物染成红色。 美兰主要离解为碱性的美兰离子，在遇到酸性蛋白质如疟原虫、淋巴和大单核细胞的胞浆、嗜碱性白细胞的颗粒等即可结合染成兰色。 血膜染色（二）染色的原理 美兰与伊红都不能使原虫和白细胞的核着色，必须由天青作为媒介（染媒）才能使其着色。天青虽然也是碱性染剂，但又具有染媒作用，使原虫核和白细胞核等原来只能染上极淡蓝色的结构染上显著的酸性染剂伊红，这样，就使白细胞粗大的核染成显著的既蓝又红的紫蓝色，而较小或菲薄的原虫核和淋巴细胞原浆中的颗粒染成紫红色。 如果你染色的质量不高应该做些什么？ 首先，检查每一个技术步骤是否合理？如采血涂片、固定、稀释染液，清洗染液器具以及储存各项操作都符合要求 如果依然得不到合格的染色后的血片。那么很可能是水的质量不过关（PH值不合适）或者吉氏原液自身质量不过关。 有时候仅仅是一部分片子的染色不理想，这种情况下，可以重新涂片。如果情况不允许，你可以重新染色。 血膜染色（二）染色的原理 染色原理是染料于被染物的阴阳离子互相吸附而结合的一种化学反应。 各种细胞和疟原虫主要是由不同的蛋白质或类氨基酸组成。不同的氨基酸均含有氨基（NH2）和羧基（COOH）。在游离状态时，氨基（NH2）获得一个氢离子成为带阳电的离子（NH3 + ）；而羧基失掉一个氢离子成为带阴电的离子（COO — ）。 血膜染色（二）染色的原理 主要染料都含有美蓝、伊红和美蓝氧化后的天青。 美蓝的有色基团带阳离子，是一种碱性染料，用的是盐酸美蓝。溶于水后离解为带阴电的氯离子和能着色的美蓝阳离子。 伊红的有色基团带阴离子，是一种酸性染料，染色用的是伊红钠盐。溶于水中时离解为带阳电的钠离子和带阴电的伊红离子。 天青为美蓝氧化而成。虽为碱性染剂，在染色中起染媒作用。 血膜染色（二）染色的原理 染色化学反应反应的示意图： 疟原虫细胞浆的阴离子（COO—）＋ 美蓝阳离子—→呈蓝色 ┏天青（染媒作用） 疟原虫核的阳离子（NH3+）＋┫ －→ 呈紫红色 ┗伊红阴离子 血膜染色（二）染色的原理 蛋白质本身是阴阳电荷是相等，带有两基性的。所以其所带阴阳电荷的数量可受周围液体的酸碱度（PH）而改变，在偏酸的溶液中阳离子增加，易于伊红结合，着色偏红。在偏碱的溶液中阴离子增加，易于美蓝结合，着色偏蓝。这就说明了为何配制染液的酸碱度直接影响了血片染色的质量，偏酸着色过红，偏碱着色过蓝。所以在染血片时稀释液要控制在PH7.2，最为适宜，疟原虫的结构才能清晰可见。 吉氏染色血片外观 偏 酸 偏 碱 标 准 1、吉氏染液的配制： 这是目前最常用的疟原虫染色剂，它具有方便、染色效果稳定的优点，也是我们推荐的染色方法。 将吉氏粉5g置于研钵中，加入少量甘油充分研磨，然后边加边磨，至甘油250ml加完为止，倒入500ml有塞玻璃瓶中。在研钵中加入少量甲醇，洗掉剩余部分，倒入瓶内，再次加甲醇，洗后再倒入瓶中，至甲醇250ml洗清研钵中甘油为止。塞紧瓶塞，充分摇匀，置室温内，每天用力摇动溶液5分钟，3天后即可使用。 也可在带有紧口瓶塞的硬质玻璃瓶中放入