产共轭亚油酸鼠李糖乳杆菌的筛选与鉴定 screening and identification of conjugated linoleic acid-producing lactobacillus rhamnosus.pdfVIP

中国食物与营养 2012，18(5)：33—36 FoodandNutritioninChina 产共轭亚油酸鼠李糖乳杆菌的筛选与鉴定 方 丽 一，闽伟红 ，刘 嘉 ，刘景圣 (吉林农业大学食品科学与工程学院，长春 150118； 小麦和玉米深~j~-r国家工程实验室，长春 15O118) 摘 要：从东北传统酸菜汁中筛选出具有产共轭亚油酸 (CLA)能力的乳酸茵菌株 15株，采用紫外分光度 计法测定发酵液中共轭亚油酸产量 ，其中菌株A55．2的产量最高，在MES培养基中添加0．4mg／mL 亚油酸 (LA)， 57。c发酵24h，CLA产量达 14．9I“g／mL。通过对茵体的形态特征和生化特性分析，并结合 16SrDNA分子生物学以及 系统发育分析鉴定菌株A55．2为鼠李糖乳杆茵。 关键词 ：共轭亚油酸；鼠李糖乳杆菌；筛选 ；鉴定 共轭亚油酸 (conjIugatedlinoleicacid，CLA)是含有 1 材料与方法 顺式或反式共轭双键的十八碳二烯酸，是必需氨基酸亚 油酸 (1inoleicacid，LA)的一组位置和构象异构体的总 1．1 材料与试剂 称。CLA的立体异构体多达几十种，其中有两种异构体 东北传统酸菜，市售；亚油酸 (纯度 90％)，阿拉 cis一9，trans一11CLA和 trans一10，cis一12CLA最具生物活 丁试剂 (中国)有限公司；共轭亚油酸 (纯度z99％)， 性 112]。近年来，大量试验证明，CLA具有抗癌、抗动 Sigma公司；牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、琼脂为生化试 脉粥样硬化、调节免疫力、促进生长发育和减肥等生 剂；正己烷、无水硫酸钠、麦芽糖、葡萄糖、磷酸氢二 理功能口，由于这些独特生理作用，CLA被誉为20世 钾、乙酸钠、柠檬酸铵、硫酸镁、吐温80、溴甲酚紫、 纪80年代末发现的最具有重要生理功能的脂肪酸，并 无水硫酸钠均为分析纯；PCR(Taq)扩增试剂盒 (含染 且CLA在临床、保健、食品添加剂等领域 已经得到应 料)，生工生物工程 (上海)有限公司；琼脂糖，西班 用5J【o 牙Biowest公司。 目前，CLA的生产多采用化学法合成，所得的产物 1．2 仪器与设备 是多种异构体的混合物。与化学法相 比，生物合成法的 UV-7100紫外分光光度计，日本岛津；CL．32L全 自 反应条件温和，生成异构体组成比较单一，与天然食物 动高压灭菌器 ，日本ALP；BCN一1360超净工作台，哈 中CLA异构体组成相似 ，因此越来越受到研究者的重 尔滨东联仪器制造有限公司；MP6001电子天平，上海 视。研究表明，大多数乳酸菌能够转化亚油酸生成共轭 恒平科学仪器有限公司；BSA224S分析天平，北京赛多 亚油酸，同时乳酸菌含有的亚油酸异构酶对底物具有很 利斯仪器 (北京)有限公司；GNP一9080隔水式恒温培养 强的专一性，乳酸菌兼性厌氧，培养条件易于控制，无 箱，上海精宏实验设备有限公司；Z36HK高速冷冻离 毒安全，乳酸菌又是一种人体益生菌，可以直接将其应 心机，德国Hermle公司；Mastercyclerpro梯度PCR仪， 用于医药、饲料和食品等领域 。因此，利用乳酸菌来 Effendorf中国有限公司；WHF一201BJ紫外可见透射反射 生产CLA具有很好的应用前景。 仪，上海精科实业有限公司；DYY-6C型电泳仪电源， 本试验从东北传统酸菜汁中筛选具有产CLAN~力 上海六一仪器厂；Jin—x水平琼脂糖凝胶电泳槽，大连竞 的乳酸菌，采用紫外分光光度计法测定CLA的产量，通 迈生物科技有限公司。 过菌落形态观察，革兰氏染色和相关