单宁酶水解石榴皮多酚的工艺优化及酶解产物鉴定孙雨晴.pdfVIP

网络出版时间：2017-09-28 06:35:38 网络出版地址：/kcms/detail/11.5461.S0635.016.html 动物营养学报２０１７，２９（１１）：　 ⁃　 ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ ＡｎｉｍａｌＮｕｔｒｉｔｉｏｎ 　 ｄｏｉ：１０．３９６９／ ｊ．ｉｓｓｎ．１００６⁃２６７ｘ．２０１７．１１．０００ 单宁酶水解石榴皮多酚的工艺优化及酶解产物鉴定 １，２ １ １∗ 孙雨晴 　 陶　 新 　 徐子伟 （１．浙江省农业科学研究院畜牧兽医研究所，杭州 ３１１００２１；２．南京农业大学动物科技学院，南京 ２１００９５） 摘　 要： 从石榴皮中提取的多酚具有抗炎、抗氧化、抗癌等多种生物活性，但是其中的大分子的 鞣花单宁如安石榴苷（ＰＧ）不能被动物胃肠道直接吸收，需要先水解成小分子物质如鞣花酸 （ＥＡ）才能被吸收进入血液来发挥其生物功能。 本试验利用单宁酶将石榴皮多酚中的大分子单 宁（相对分子质量＞５００）水解为小分子酚酸，旨在优化酶解工艺及产物纯化工艺，阐明酶解前后 石榴皮多酚在成分上的变化，为石榴皮多酚作为促进动物健康的功能性饲料添加剂的开发利用 提供基础数据。 通过比较单宁酶水解前后石榴皮多酚的高效液相色谱指纹图谱，确定ＰＧ 降解 率和ＥＡ生成率为水解程度检测指标后，利用单因素试验和正交试验优化酶解条件。 通过静态 － 吸附和动态吸附试验确定大孔树脂纯化条件，并用液相色谱 质谱联用技术鉴定酶解前后石榴 皮多酚在成分上的变化。 结果显示：最佳酶解条件为ｐＨ ５．２、温度４５ ℃、加酶量３０ ｍＬ／ ｇ底物、 底物浓度４ ｇ／ Ｌ，时间１６ ｈ。 最佳酶解产物纯化条件为Ｄ１０１型大孔树脂，９５％乙醇为洗脱剂，上 样体积为３００ ｍＬ，洗脱体积为１２０ ｍＬ。 高效液相色谱检测显示原石榴皮多酚中含有４３．６４％的 ＰＧ（相对分子质量１０８４）、４．８５％的ＥＡ（相对分子质量３０２），酶解产物中ＰＧ含量为０．００％、ＥＡ 含量为４５．７３％。 原石榴皮多酚中分析出７ 种主要多酚化合物，质荷比（ｍ／ ｚ）分别为 １ ０８３、 １０８３、７８３、７５７、６３３、４０１、３００，相对分子质量分布在３０２～１ ０８４；酶解产物中分析出４ 个主要多 酚化合物，ｍ／ ｚ分别为６００、３００、２９１、２４７，相对分子质量分布在２４８～６０２。 本试验利用单宁酶将 含大量以ＰＧ 为主的鞣花单宁的石榴皮多酚水解成富含小分子多酚ＥＡ 的酶解产物，并优化建 立了最佳酶解条件及酶解产物纯化条件，可为石榴皮多酚的开发及其在饲料生产中的应用提供 基础数据。 关键词： 石榴皮多酚；单宁酶；酶解；工艺优化 中图分类号：Ｓ６６５．４　 　 　 　 文献标识码：Ａ　 　 　 　 文章编号：１００６⁃２６７Ｘ（２０１７）１１⁃００００⁃００ 　 　 在畜禽养殖过程中，高密度饲养、断奶应激、 解氧化应激，提高畜禽的健康水平和肉品质量。 热应激、细菌病毒感染、霉变饲料、过氧化饲料等 　 　 石榴是富含抗氧化活性成分的水果，其果皮 ［２］ 能够引起动物的应激反应，导致疾病或生理异常。 抗氧化活性成分含量尤其高 。 有研究表明石榴 研究表明氧化应激与人和动物绝大多数应激反应 皮提取物的体外抗氧化活性在 １ ０００ 多种植物提 ［３］ 和疾病有密切的关系。 氧化应激不仅引发动物脓 取物中位列第一 ，且多酚是其发挥抗氧化作用 血症、乳房炎、肠炎、肺炎和关节炎等疾病，还增加 的主要成分。 除了抗氧化以外，石榴皮多酚还具