改良Trizol法快速高效提取香石竹总RNA.pdfVIP

分子植物育种，2010年，第8卷，第5期，第987—990页 MolecularPlantBreeding，2010，Vo1．8，No．5，987—990 技术改进 UpgradedTechnoloy 改 良Trizol法快速高效提取香石竹总RNA 王舒藜 吴沙沙 吕英民 北京林业大学园林学院，国家花卉工程技术研究中心，北京，100083 通讯作者，Luyingmin@bjfu．edu．ca 摘 要 因为多糖等大分子的污染，传统Trizol法难 以从香石竹的叶片中获得完整RNA。本研究以香石竹 为材料，对传统的Trizol法进行改 良，成功地从香石竹花瓣和叶片中提取了总RNA，经琼脂糖 电泳，紫外分 光光度计测定总RNA完整性好，纯度大，花瓣的OD~oO／D∞=1．96，每 0．1g花瓣可获得 RNA61Ixg，叶片 RNA的OD26o／OD28o：1．94，每0．1g幼叶可获得RNA33Ixg，花瓣的RNA产量普遍高于叶片。经改 良Trizol 法提取的被香石竹斑驳病毒侵染的植株的花瓣和叶片的总RNA，经RT—PCR获得了特异性条带，说明用改 良Trizol法从香石竹花瓣和叶片中提取的RNA质量好、产率高、完整性强，完全适合于香石竹进一步的分 子生物学研究。 关键词 香石竹，总RNA提取，改 良Trizol法 QuickandHighEfficientExtractionofTotalRNAfromCarnationwithIm— provedTrizolMethod W angShuli WuShasha LvYingmin’ CollegeofLandscapeArchitecture，BeijingForestryUniversity,NationalCenterforFloricultureEngineeringTechnology,Beijing,100083 Correspondingauthor，Luyingmin@bjfu．edu．cn DOI：10．3969／mpb．008．000987 Abstract ThetraditionalTrizolmethodisdifficulttoobtaincompleteRNA from leavesofcarnationbecauseof polysaccharidesandothermacromoleculespollution．BymodifyingthetraditionalTrizolmethod，weextractedto— talRNA successfullyrfom carnationpetalsandleaves．TestedbyagarosegelelecrtophoresisandUV spectropho— torneter，integrityandpuriytoftotalRNAproveprettygood．OD26oO／D280ofRNA rfompetalsis1．96，andabout 61Ixgcanbeachievedper0．1gpetalaswellasOD26o／OD28oofRNA rfom leavesis1．94，andabout33IxgRNA canbeachievedper0．1gyoungleaves．Generally．theRNA yieldofpetalsishigherthanleaves．Specificbands canbeobtainedbyRT—PCR totalRNA from theplant’spetalsandleavesinfectedbycarnationmottlevirus，which indicatesthatthemodifiedTrizolmethodcanexrtactRNAwithgoodqualiyt，highproductionrateandstrongin— tegrity，completelysuitableforufrthercarnationmolecularbiology． Keywords Camation(Dianthuscaryophyllus)，ExtractingtotalRNA，ModifiedTrizolmethod 香石竹(DianthuscaryophyllusL．)，又称康乃馨，是 物学法、电子显微镜法、血清学法和反转录聚合酶链 世界主要切花品种之一。由于病毒的侵染，使其不同 式反应等。其中RT．PCR方法已被证实是 目前特异 程度地出现植株矮化、畸形、花叶、花苞开裂和花碎色 性最强、灵敏度最高的病原检测方法 。从香石竹叶片 等症状，大大降低 了其