生物化学 第十七章核酸技术.pptVIP

第17章 核酸技术Technology of Nucleic Acid;本章主要内容：; 对遗传分子核酸的结构与功能的阐明，用于研究核酸的工具酶的开发，由核酸的分子杂交性质建立起的一系列分析技术，使我们已经能够按照自己的意愿来摆布和操作基因，去改变生命有机体的遗传性状，甚至制造出新的物种，以服务于人类。重组DNA技术使人类千百年的梦想变为了现实。;生长激素基因注入小鼠受精卵中培育出了“硕鼠”;1.DNA重组技术; 50年来，核酸酶学的进步为DNA的分析与鉴定提供了有力的工具。主要的核酸酶有： DNA聚合酶（DNA polymerase ） klenow 片段， Taq 酶 限制性核酸内切酶（restriction endonuclease ） 逆转录酶（Reverse transcriptase） S1核酸酶（ S1 nuclease） 连接酶（Ligase） 拓扑异构酶（Topoisomerase）等;限制性核酸内切酶—— 一把神奇的“手术刀”;限制性内切酶（有专一的切点并常在切口处留下黏性末端）;目的基因克隆的技术路线;黏性末端;目的基因的制备;质粒是可以独立复制 并在细菌之间转移的 遗传单位，质粒还能 赋予宿主菌某种表型 其他的基因载体还有 如：噬菌体，病毒等;含有目的基因的重组宿主细胞（如细菌）可以通过 规模化的基因工程生产目的蛋白（如激素）; 古埃及一具木乃伊的一个 DNA 片段已经得到克隆 打开了人们窥探过去的窗户;2.基因鉴定;;DNA核苷酸序列分析 ; 利用一个标记的（如用同位素标记），特异的，单股DNA或RNA片段——探针（probe）， 可以： 研究DNA之间的亲缘关系； 发现基因的缺失或突变； 测定某种遗传信息的量； 鉴定某种基因 基因治疗等;分子杂交是一系列基因鉴定方法的基础 印迹技术（ Blotting） Southern blot——用探针鉴定DNA Northern blot——用探针鉴定RNA 原位杂交（Hybridization in situ） 指纹分析（Finger printing） 基因芯片（ DNA microarray）;分子杂交等技术可用来筛选重组克隆; 用探针鉴定DNA 称为Southern 印迹,鉴定RNA称 为Northern印迹;染色体的原位杂交;基因芯片的应于 发育生物学研究;在基础研究和应用领域具有广泛用途的DNA 芯片;同一物种不同生态型之间DNA多态性产生的RFLP ;DNA指纹分析应用于刑侦 ;从上世纪90年代初开始，用了10年时间，人类完成了 对自身染色体的30亿对碱基的序列测定，这就是所谓 的人类基因组项目（HGP）; 在人类基因组项目基本完成之后，人类蛋白质组项目将要展开，旨在对人类基因组表达的全部蛋白质进行全面的、高通量的、精细的分析，这是后基因组时代的新的研究领域，对于人类认识自己，控制疾病的意义将难以估量。;3.核酸技术的应用; 动物生物化学练习（3） 1.氨基酸参与了动物体内一些重要含N 小分子的合成。请指出以下3种物质的主要功能，它们各由哪些氨基酸为原料转变而成。 a. 肾上腺素； b. 磷酸肌酸； c. 嘧啶 ? 2.DNA的复制包括哪些主要阶段？为什么复制具有半保留性？为什么说子链的合成是半不连续的？ ? 3.转录的终止出现在DNA分子中特定的碱基顺序上。原核DNA转录的终止顺序有明显的结构特点，请予描述。除此以外，还有什么其它的终止转录的方式？ ;4. 关于蛋白质多肽链的翻译过程，请你 a.说明氨基酰-tRNA合成酶的特点； b.图示原核70S 起始复合物； c.解释延伸因子Tu的作用； d.指出何时肽酰基转移酶起作用。 ? 5. 简述肾上腺??通过cAMP/PKA途径中酶的级联放大效应催化肌肉糖原分解的生物化学原理。