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第三章 细胞生物学的研究方法练习题一、不定向选择题（0.5分/题）1、用于活细胞观察的技术有（ ABC ）。 A 相差显微镜技术B 微分干涉显微镜技术C 暗视野显微镜技术2、可用（B ）技术来研究质膜结构的不对称性？ A 荧光显微镜技术B 冰冻断裂-蚀刻技术C 相差显微镜技术3、假设你对重建生活细胞的有丝分裂过程中染色体的三维结构感兴趣， 你将选择哪种技术（C ）？ A 冰冻断裂-蚀刻技术B 扫描电镜技术 C 激光共焦点扫描显微镜技术4、如果对生物大分子进行动态研究和追踪，你采用哪种技术？（AB ） A 放射自显影技术B 荧光共振能量转移技术 C 超速离心技术5、流式细胞仪可用于（ ABCD ）。 A 细胞分选B 蛋白质含量测定C DNA含量测定D RNA含量测定 二、名词解释（1分/题） 1、单克隆抗体技术2、原位杂交技术 3、免疫荧光标记技术4、细胞融合三、动物克隆过程中应用了哪些技术？（1.5分）细胞拆合、细胞培养、显微操作技术◆膜蛋白在膜中位置测定： 可以通过非通透性试剂对蛋白质进行标记或修饰实验进行。A B C根据右图各处理细胞的膜蛋白SDS-聚丙烯凝胶电泳的带型判断5种膜蛋白在膜中的位置，用简图表示。A）对照B）用不能透过细胞质膜的胰蛋白酶 处理完整的细胞C）先提高细胞质膜的透性，再用胰 蛋白酶处理透性细胞333 22244455112、细胞外基质（ extracellular matrix ，ECM）： 指分布于细胞外空间, 由细胞分泌的蛋白和多糖所构成的网络结构。动物细胞外基质的基本成分是 、 、 、 和 。其中 能够 形成水性的胶状物，构成细胞外基质的基质； 和 构 成细胞外基质的骨架，赋予细胞外基质一定的强度和韧性； 和 起粘着作用，促使细胞同细胞外基质结合。2、细胞外基质（ extracellular matrix ，ECM）： 指分布于细胞外空间, 由细胞分泌的蛋白和多糖所构成的网络结构。动物细胞外基质的基本成分是胶原蛋白 、 弹性蛋白 、蛋白聚糖 、 纤连蛋白 和 层黏连蛋白 。其中 蛋白聚糖 能够形成水性的胶状物，构成细胞外基质的基质；胶原蛋白和 弹性蛋白 构成细胞外基质的骨架，赋予细胞外基质一定的强度和韧性；纤连蛋白和 层黏连蛋白起粘着作用，促使细胞同细胞外基质结合。3、细胞识别（Cell Recognition） 指细胞对同种或异种细胞、同源或异源细胞以及对自己和异己分子 的认识和鉴别。4、细胞黏着（Cell Adhesion） 指在细胞识别的基础上,细胞发生聚集形成细胞团或组织的过程。既可介导同亲型细胞黏着，又可介导异亲型细胞黏着的细胞黏着分子是 D 。 A.钙黏蛋白B.整联蛋白C.选择素D.免疫球蛋白超家族练习题 ： 1、假若你新发现一个新的细胞膜蛋白，通过序列分析提示为一个多次跨膜蛋白。为了确定跨膜次数及其末端朝向，你在细胞内高表达了该蛋白：1）通过免疫荧光技术标记细胞，发现用抗N端抗体直接标记活细胞时，出现膜上荧光，而用抗C端抗体时却没有。用甲醇固定细胞（此时细胞膜被破坏）后，则两种抗体都出现膜上荧光标记；2）如果先将细胞膜分离纯化，然后用蛋白酶充分降解膜外部分，再经SDS和银染，发现有10条主带，其中3条在对照细胞（即仅转染了空质粒载体的细胞）的相应细胞中也有；3）如果先用蛋白酶处理，再分离细胞膜，则发现6条主带，对照样品有其中的2条。从以上实验结果，试分析该多次跨膜蛋白的结构。2、比较cAMP信号通路和磷脂酰肌醇信号通路的异同点。答案：实验结果分析：(1)用抗N端抗体直接标记活细胞时，出现膜上荧光，而用抗C端抗体时却没有出现膜上荧光。说明所研究的膜蛋白多态链的N端在胞外，C端在胞内。?(2)将细胞膜分离纯化，然后用蛋白酶充分降解膜外部分，再经SDS和银染，发现有10条主带，其中三条在对照细胞(即仅转染了空质粒载体的细胞)的相应样品中也有。说明所研究膜蛋白极有可能是7次跨膜的多肽链，另外的三次跨膜结构是质粒载体自身核苷酸序列表达的。?(3)如果先用蛋白酶处理，再分离细胞膜，发现了6条主带，而对照样品有其中的两条。说明多肽链在胞内由四部分组成(三个环状结构域+C端部分)，另外的胞内结构区域是质粒载体自身核苷酸序列表达的。?(4)综上所述：所研究的膜蛋白多肽链的N端在胞外，C端在胞内；多肽链是7次跨膜形成的，在胞内和胞外分别有三个环状结构域，其结构模型与7次跨膜的G蛋白偶联受体极其相似。练习题：1、两个蛋白激酶K1和K2，在胞内信号级联反应中依次起作用。如果两个蛋白激酶中任何一个含有致其永久性失活的突变，则细胞对胞外信号无反应。假如一种突变使K1永久激活，则在含有该种突变的细胞中即使没有胞外信号也可观察到一种响应。现有一种双突变细胞