基于滤纸微孔板的酶联免疫吸附测定方法研究-分析化学.PDFVIP

第4 1 卷 分析化学 (FENXI HUAXUE )摇 研究报告 第1 期 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 2013 年1 月 Chinese Journal of Analytical Chemistry 20 ~24 DOI:10.3724/ SP.J.1096.2013.20420 基于滤纸微孔板的酶联免疫吸附测定方法研究 * 白鹏摇 罗雁摇 李 英摇 余晓冬 摇 陈洪渊 (南京大学化学化工学院,生命分析化学国家重点实验室,南京2 10093 ) 摘摇 要摇 用光刻法在普通定量滤纸上制作出了疏水图案,得到了滤纸微孔板。 将表面修饰后的SiO2 微球负 载在滤纸表面,以提高滤纸纤维吸附蛋白质的能力,基于此建立了以间接酶联免疫吸附法测定羊抗兔免疫球 蛋白的方法。 以酶标兔抗羊IgG 为例,负载SiO2 微球后,滤纸微孔板吸附该蛋白质的量提高了20% ~700% ; 将SiO2 负载法应用于羊抗兔IgG 的检测时,可使信号增强20% ~150% 。 在本实验条件下,测定羊抗兔IgG 的线性范围为3伊10-12 ~3伊10-8 mmol/孔。 本方法使生物免疫试剂消耗量减少至3 ~5 mL/孔、检测时间降至 20 min/板、滤纸微孔板制作成本可低至约每板1.1 美元,为研制准确、快速和低成本的疾病检测设备提供了新 的思路和可能性。 关键词摇 滤纸;微孔板;光刻;酶联免疫分析;二氧化硅微球 1摇 引摇 言 近年来,随着微流控芯片技术的迅速发展,纸作为一种廉价易得的材料进入了科研工作者的视线。 纸轻薄、可燃、易加工,表面能修饰多种功能基团或共价结合蛋白质、DNA 和一些小分子,其强吸水性使 [1] 得设备不需要额外的动力系统 。 基于纸的诸多优点,研究人员通过多种加工方法将其作为基材,引入 了微流控分析设备,以期实现快速、实时并且价格低廉的疾病诊断,从而为广大的发展中国家和地区提 [2 ~9] 供更为经济的疾病监控方法 。 制作纸基检测装置的第一步是在纸上制造出疏水的隔离带,从而让亲水部分(即纸)形成所需的通 [6] 道、网络或其它形状。 Dongchai 等 用丝网印刷技术将固体蜡涂在滤纸表面,加热后蜡渗入滤纸即可形 [10] 成相应的图案。 Bruzewicz 等 使用改装的绘图机将溶解在正己烷中的聚二甲基硅氧烷(PDMS )“绘 [3] 制冶在滤纸上,获得疏水壁垒。 Li 等 成功地将具有纤维素反应活性的疏水化试剂以喷墨打印的方式印 [4] 制在纸上,利用这种办法还可以将生物分子或指示试剂输送到纸上的特定位置。 Abe 等 用喷墨蚀刻 法除去了纸上的聚苯乙烯涂层,得到亲水性通道;与之类似的还有用等离子氧化的方法来去除疏水涂 [11] 层 。 然而,由于涂层或“墨水冶通常只能被涂覆在纸的表面,上述印刷类方