杂色鲍血淋巴双向电泳与质谱分析.PDFVIP

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2017-11-27 发布于天津
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杂色鲍血淋巴双向电泳与质谱分析.PDF

杂色鲍血淋巴双向电泳与质谱分析 1,2 1 1 , , (1. , 510300; 2. , 201306) 摘要: 以杂色鲍(Haliotisdiversicolor)血淋巴为材料进行了双向电泳研究。首先, 确定了以丙酮沉淀法和 RC DC 蛋白定量试剂盒为基础的蛋白制备与定量方法; 其次, 对样品前处理方法进行了摸索, 通过 500 r/min 的低速离心方法分离了血细胞和血浆组分, 通过35 000 r/min 超速离心2 h 除掉了部分高丰度的血蓝蛋白, 降低了高分子量区域的血蓝蛋白背景; 进一步使用 18 cm pH 3-10 非线性胶条和标准化的电泳程序, 对不同上样量的电泳银染结果进行了比较, 获得了良好的双向电泳图谱; 最终选取肌动蛋白、原肌球蛋白、胶原蛋白和血蓝蛋白4 个蛋白点成功进行了质谱鉴定。关键词: 杂色鲍(Haliotisdiversicolor); 血淋巴; 血浆; 双向电泳; 蛋白质组中图分类号: S917 文献标识码: A 文章编号: 1000-3096(2013)03-0102-07 (Haliotisdiversicolor), (Bonamia ostreae)[8] , , (Penaeus vannamei) [15] , (Fenneropenaeus chinensis) [16] [7] , [1-2] , , , [3] 1 材料与方法 (Two-dimensional gel electrophoresis, 2-DE) 1975 [4], 1.1 试验材料 [5] [6-7] [8] () , [9] (30 5)g; , , (20±5)g, 15~18.5 3050 cm×30 cm×40 cm , () , 1.2 试剂与仪器 , [10-11] , pH IPG strip (pH 3-10, 18 cm)IPG buffer(pH 3-10)Drystrip : (Coeloma