第三章 抗生素类药物-第一节 概述.ppt

发酵过程中主要控制罐温、通气量及搅拌转速、补料、加酸碱、消泡剂、某些专用前体、促进剂或抑制剂的用量。 4.2.5 发酵液的预处理及过滤 发酵液的过滤和预处理其目的不仅在于分离菌丝，还需将一些杂质除去。尽管对多数抗生素品种在生产过程中，当发酵结束时，抗生素存在于发酵液中，但也有个别品种当发酵结束时抗生素大量残存在菌丝之中，在此情况下，发酵液的预处理应当包括使抗生素从菌丝中析出，使其转入发酵液。 （1）发酵液的预处理 发酵液中的杂质如高价无机离子(Ca+2、Mg+2、Fe+3)和蛋白质在离子交换的过程中对提炼影响甚大，不利于树脂对抗生素的吸附。如用溶媒萃取法提炼时，蛋白质的存在会产出乳化，使溶媒和水相分层困难。对高价离子的去除，可采用草酸或磷酸。如加草酸则它与钙离子生成的草酸钙，还能促使蛋白质凝固以提高发酵滤液的质量。 如加磷酸(或磷酸盐)，则既能降低钙离子浓度，也易于去处镁离子。 Na5P3O10+Mg2+=MgNa3P3O10+2Na+ 如加黄血盐及硫酸锌，则前者有利于去除铁离子，后者有利于凝固蛋白质。此外，这二者还有协同作用。它们所产生的复盐对蛋白质有吸附作用。 2K4Fe(CN)6+3ZnSO4→K2Zn3[Fe(CN)6]2↓+3K2SO4 对于蛋白质，还可利用其在等电点时凝聚的特点而将其去除（法1）。蛋白质一般以胶体状态存在于发酵液中，胶体粒子的稳定性和其所带的电荷有关。它属于两性物质，在酸性溶液中带正电电荷，在碱性溶液中带负电荷，而在某一pH下，净电荷为零，溶解度最小，称为等电点；因其羧基的电离度比氨基大，故很多蛋白质的等电点在酸性(pH 4.0~5.5)范围内。 某些对热稳定的抗生素发酵液还可用加热法（法2）。使蛋白质变性而降低其溶解度。蛋白质从有规律的排列变成不规则结构的过程称为变性。加热还能使发酵液粘度降低、加快滤速。例如在链霉素生产中就可用加入草酸或磷酸将发酵液调至pH 3.0左右，加热至70℃，维持约半小时，用此方法来去除蛋白质，这样滤速可增大10~100倍。滤液粘度可降低至1/6。如抗生素对热不稳定，则不应采用此法。 为了更有效地去除发酵液中的蛋白质，还可以加入絮凝剂（法3）。它是一种能溶于水的高分子化合物。含有很多离子化基团，如－NH2 —COOH，—OH等。如上所述，胶体粒子的稳定性和它所带电荷有关。由于同性电荷间的静电斥力而使胶体粒子不发生凝聚。絮凝剂分子中电荷密度很高，它的加入使胶体溶液电荷性质改变从而使溶液中蛋白质絮凝。 对絮凝剂的化学结构一般有下列几种要求：1)其分子中必须有相当多的活性基团，能和悬浮颗粒表面相结合。2)必须具有长链线性结构，但其相对分子质量(分子量)不能超过一定限度，以使其有较好的溶解度。 在发酵滤液中多数胶体粒子带负电荷，因而用阳离子絮凝剂功效较高。例如可用含有季胺基团的聚苯乙烯衍生物，分子量在26000~55000范围内。加入絮凝剂后析出的杂质再经过滤除去，以利于以后的提取。 （2）发酵液的过滤 发酵液为非牛顿型液体、很难过滤。过滤的难易与发酵培养基和工艺条件，以及是否染菌等因素有关。过滤如用板框压滤则劳动强度大，影响卫生，菌丝流入下水道时还影响污水处理。故以选用鼓式真空过滤机为宜，并在必要时在转鼓表层涂以助滤剂硅藻土。当转鼓旋转时，以刮刀将助滤剂连同菌体薄薄刮去一层，以使过滤面不断更新。 另一种设备是自动出渣离心机，但所排出的菌丝滤渣中尚含有较大量的发酵液，因此如要提高过滤收率，可将此滤渣以水洗后再次用同样型号离心机分离。第一次和第二次离心分离液体合并后进入下一工序。 再一种设备称倾析器(De canter)。它既可用于固、液相的分离，也可用于固相、有机溶媒相和水相三者的混合和分离，从而将过滤菌丝和溶媒萃取这两步合并在这一设备中完成。这就简化了发酵液后处理工艺，提高了收率，并缩短了生产周期，也节约了劳动力、厂房和成本。 4.2.6 抗生素的提取 提取的目的是在于从发酵液中制取高纯度的符合药典规定的抗生素成品。在发酵滤液中抗生素浓度很低，而杂质的浓度相对地较高。杂质中有无机盐、残糖、脂肪、各种蛋白质及其降解物、色素、热原质、或有毒性物质等。此外，还可能有一些杂质其性质和抗生素很相似，这就增加了提取和精制的困难。 由于多数抗生素不很稳定，且发酵液易被污染，故整个提取过程要求：1)时间短；2)温度低；3)pH宜选择对抗生素较稳定的范围；4)勤清洗消毒(包括厂房、设备、管路并注意消灭死角)。 常用的抗生素提取方法包括有溶媒萃取法、离子交换法和沉淀法等。 (1) 溶媒萃取法 这是利用抗生素在不同pH条件下以不同的化学状态(游离酸、碱或成盐)存在时，在水及与水互不相溶的溶媒中其溶解度不同的特性，使抗生素从一种液相(如发酵滤液)转移到另一种液相