抗人甲胎蛋白单克隆抗体的制备及双抗体夹心-中国医药生物技术.pdfVIP

268 中国医药生物技术 2014 年 8 月第 9 卷第 4 期 Chin Med Biotechnol, August 2014, Vol. 9, No. 4 DOI:10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2014.04.004 ·抗体药物研究新趋势· 抗人甲胎蛋白单克隆抗体的制备 及双抗体夹心 ELISA 检测技术的建立 孙一帆，杨全利，黄建芳，赵凤芝，向军俭 【摘要】 HSA 替代物[1-2] 。正常情况下，hAFP 仅存在于胎儿 目的 制备、筛选多株具有商用价值的可配对的高特异性、 血清中，胎儿出生一年后 hAFP 浓度降回正常人水 高亲和力的抗人甲胎蛋白（hAFP ）单克隆抗体，初步建立 平（ 5 ng/ml ），正常人血清中的浓度一般不高于 双抗体夹心 ELISA 检测方法。 20 ng/ml 。当身体发生原发性肝癌时，肝癌细胞可 方法 通过经典的淋巴细胞杂交瘤技术筛选分泌抗 hAFP 大量分泌 hAFP 于外周血中，引发血液 hAFP 浓 单抗的杂交瘤细胞株；对筛选所得单抗的特性进行鉴定分 度的异常升高。 析；双抗体夹心 ELISA 法筛选最佳配对抗体；初步建立 hAFP 是最早发现的肿瘤标志物之一，其长期 DAS-ELISA 检测方法并检测血样，绘制其标准检测曲线并 以来被作为肝癌、胎儿缺陷以及胚胎相关癌的重要 与进口试剂盒比较。 血清分子标记物，是血液检验中的重要评价指标分 结果 共获得 12 株稳定分泌抗 hAFP 单抗的杂交瘤细胞 子[3-4] 。除应用于产前诊断和肝细胞癌诊断外，hAFP 株，其中 Ab 1 ~ Ab 5 5 株单抗的腹水效价均高于 600 万， 的血液检测对肝损伤、肝硬化、肝炎、肠胃癌、神 Ab 5 的效价高达 3000 万；特异性鉴定结果表明 Ab 1 ~ 经管损伤、内胚窦瘤、生殖系统癌症等疾病的诊断 Ab 5 均能够特异识别天然 hAFP 分子，但 Ab 5 与人血清 及病情监控也具有重要意义[5-6] 。 白蛋白（HSA ）存在较强交叉反应；抗体配对实验共筛选出 中国是个人口大国，产前诊断与每个家庭都息 5 对（Ab 1/HRP-Ab 2 、Ab 1/HRP-Ab 4 、Ab 3/HRP-Ab 2 、 息相关；同时，中国又是一个肝癌高发地区，每年 [7] Ab 3/HRP-Ab 4 和 Ab 4/HRP-Ab 1 ）能够满足 hAFP 检测 死于肝癌的人数占全世界死亡人数的 40% 以上 ， 要求且无交叉反应的配对抗体，最终确定 Ab 1 + Ab 3/ 由于中晚期肝癌基本无有效治疗方法，所以对原发 HRP-Ab 2 和 Ab 1 + Ab 3/HRP-Ab 4 为最佳配对组合；利 性肝癌特异性肿瘤抗原 hAFP 血液浓度的全民普 用最佳配对抗体组合建立标准检测曲线，其线性检测范围为 查和早期诊断是解决肝癌高死亡率的最有效措施[8] 。 因此，灵敏、特异、准确、简便、低成本的血清 hAFP 5 ~ 250 ng/ml，最低检测限 2 ng/ml ，检测上限 400 ng/ml ， 检测方法的建立迎合了社会的迫切需要。 优于进口试剂盒的线性范围 5 ~ 200 ng/ml 和最低检测限 本研究通过制备多株特异性、高亲和力的抗 5 ng/ml ；样检结果显示自制试剂盒的阳性血清检测准确率 99.2% （119/120 例），阴性血清准确率 100% （40/40 例）。 hAFP 单