环丙沙星单克隆抗体的制备及鉴定-食品科学.pdfVIP

16 2010, Vol. 31, No. 12 食品科学 ※工艺技术 1 1 1 1 2 1 , 杨先乐 ，黄宣运 ，胡 鲲 ，方 伟 ，王 炼 ，姜有声 * (1.上海海洋大学 国家水生动物病原库，上海 201306 ；2. 四川省水产学校，四川成都 401520) ：通过改进的碳二亚胺法制备环丙沙星- 牛血清白蛋白偶联物(CIP-BSA) ，用紫外扫描、十二烷基磺酸钠- 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS)方法鉴定偶联物。利用制备的CIP-BSA 偶联物作为免疫原，免疫Balb/c 小鼠，用 杂交瘤技术制备环丙沙星单克隆抗体，并对其效价、亲和力和特异性进行鉴定。结果表明：CIP-BSA 的偶联比为 30:1 。经间接酶联免疫吸附(ELISA)法筛选，共筛出两株敏感、特异的杂交瘤细胞(JY-1 、JY-2) 。这两株细胞的腹 水经纯化后的抗体效价分别为5.12 ×106 6 9 9 、2.56 ×10 ，亲和力常数分别为2.88 ×10 、2.46 ×10 L/mol ，两抗体 均为IgG1a ，取亲和力高的JY-1 进行竞争抑制测定，IC50 值可以达到9.83ng/mL 。该单抗仅与恩诺沙星存在交叉反 应，交叉反应率为95% 。通过验证得到的JY-1 细胞株分泌的单克隆抗体可用于水产品中环丙沙星残留的快速检测。 环丙沙星；半抗原；抗体；免疫 Preparation and Identification of Monoclonal Antibody against Ciprofloxacin 1 1 1 1 2 1, YANG Xian-le ，HUANG Xuan-yun ，HU Kun ，FANG Wei ，WANG Lian ，JIANG You-sheng * (1. National Pathogen Collection for Aquatic Animal, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China； 2. Sichuan Provincial Fisheries School, Chengdu 401520, China) Abstract：The ciprofloxacin-bovine serum albumin conjugate (CIP-BSA) was prepared by a modified carbodiimide method, and identified by ultraviolet spectrometry and polyacrylamide gel electrophoresis (SDS). Then CIP-BSA was used as immunogen to immunize BALB/c mice, inducing the secretion of antibodies against hapten CIP. The monoclonal antibodies (Mabs) against CIP were obtained by hybridoma technology and their titer, affinity and specificity were identified. The results showed that CIP-BSA coupling rati