(生物制药工艺学)第九章离心技术.ppt

Ficoll密度梯度离心法分离外周血单核细胞 (一)　原理: 　　红细胞、粒细胞比重大，离心后沉于管底；淋巴细胞和单核细胞离心后漂浮于分层液的液面上，吸取分层液液面的细胞，就可从外周血中分离到单核细胞。 　　(二)　方法: 　　1.　在短管中加入适量细胞分离液。 　　2.　取肝素抗凝静脉血，用滴管沿管壁缓慢叠加于分层液面上，注意保持清楚的界面。离心2000rpm×20分钟。 　　3.　离心后管内分为三层，上层为血浆，下层主要为红细胞和粒细胞。中层为淋巴细胞分离液，在上、中层界面处有一以单核细胞为主的白色云雾层狭窄带，单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞。 　　4.　用毛细血管插到云雾层，吸取单个核细胞。置入另一短中管中，加入５倍以上体积的Hanks液或RPMI1640，1500rpm×10分钟，洗涤细胞两次。 （三）等密度离心法 概念： 离心力作用下，不同密度的多组分颗粒在梯度介质中“向上”或“向下”移动，当移动至其密度与介质密度相等的位置便不再移动，形成静止区带，即达到离心平衡，各组分按密度不同处于区带的不同位置。该离心方法称等密度离心法。 特点： （1）加样位置不拘。 （2）离心平衡后，区带的位置、形状、不受离心时间影响。 （3）梯度的密度范围应包括样品中所有组分颗粒之密度。 （4）分离依据是颗粒组分间密度的差异，与颗粒大小，形状无关。 （5）离心力大小，组分颗粒的