兰州鲇_CAG_n_GATA_n微卫星文库构建与鉴定.pdfVIP

44 5 2014 9 第 卷 第 期 淡 水 渔 业 年 月 Vol. 44 No. 5 Freshwater Fisheries Sep. 2014 兰州鲇(CAG)、 (GATA) 微卫星文库 n n 构建与鉴定 1 ，2 ，3 1 ，2 ，3 1 ，2 ，3 1 2 ，3 2 ，3 1 ，3 魏大为 ，连总强 ，吴旭东 ，张利平 ，肖 伟 ，赛清云 ，王发新 ( 1. 甘肃农业大学动物科学技术 学院，兰州 730070 ; 2. 宁夏回族自治区水产研究所 ，银川 750001 ; 3. 宁夏渔业工程技术研究 中心，银川 750001) : (Silurus lanzhouensis )CAG GATA ， 摘要 应用磁珠富集法构建兰州鲇 重复和 重复的微卫星文库 并分析其序列特 。 DNA MseI ， 200 ～ 800 bp (CAG) (GATA) ， 征 兰州鲇基因组 经 酶切 选取 的片段与生物素标记的探针 8 和 6 杂交 DNA pMD19-T ， DH5 捕获到含有微卫星序列的目的 片段连接到 载体 转化到大肠杆菌 α 菌株中构建微卫星富集文 ， PCＲ 。 126 96 ， 59 库 经 检测筛选出阳性克隆进行测序 从 个阳性克隆中随机选取 个进行测序 获得 个微卫星序 (GenBank :KJ545973 ～ KJ545998 ，KJ598088 ～ KJ598120 )。 31 (52. 54% )、 20 列 登录号 其中完美型 个 非完美型 (33. 9% )、 8 (13. 56% )。 ， 48 ， 25 10 个 混合型为 个 根据侧翼序列 成功设计 对引物 选取 对微卫星引物在 个