猪MII期卵母细胞玻璃化冷冻后的凋亡途径研究-期刊.pdfVIP

上海农业学报 2017，33(I)：138—143 ActaAgriculturaeShanghai DOI：10．15955~．issnl000—3924．2017．01．24 文章编号：1000—3924(2017)01．138-06 猪 MII期卵母细胞玻璃化冷冻后的凋亡途径研究 吴彩凤，戴建军 ，钮莹芳，张树山，陈亚宁，张德福 (上海市农业科学院畜牧兽医研究所 ，上海市农业遗传育种重点实验室动物遗传工程研究室，上海201106) 摘 要：为阐明猪卵母细胞玻璃化冷冻后的细胞凋亡模式，本试验利用原位荧光染色技术对冻后卵母细胞 死亡受体介导的外源性凋亡途径和线粒体介导的内源性凋亡途径中的Caspase3、Caspase8、Caspase9和总 Caspase活性进行检测，用RT—PCR技术对不同途径中关键基因进行mRNA表达检测。结果显示 ：猪 MII期卵母 细胞冷冻后，死亡受体外源性凋亡途径的Caspase8荧光强度值 (32．03)和线粒体内源性凋亡途径 的Caspase9 荧光强度值 (16．56)，以及两者共同途径中的Caspase3和总Caspase荧光强度值 (16．70和8．43)均显著高于新 鲜卵母细胞对照组所对应的荧光强度值 (分别为4．02、4．83、4．23和3．08)。死亡受体外源性凋亡途径 TNFa、 FasL、CASP8和CASP3基因表达量也均有一定水平的提高，线粒体介导的内源性凋亡途径中CASP9、CASP3和 t953基因表达水平呈上升趋势，而Bcl2、BAX、SOD1和survivin的基因表达水平显著下降。综上所述，死亡受体介 导的外源性凋亡和线粒体介导的内源性凋亡共同参与了猪MII期卵母细胞冻后的凋亡过程。 关键词：猪 ；卵母细胞；玻璃化；细胞凋亡 中图分类号：$828 文献标识码：A TheapoptoticpathwaysofvitrifiedporcineoocytesatM IIstage WUCai—feng，DAIJian-jun ，NIUYing—fang，ZHANGShu—shan，CHENYa—ning，ZAHNGDe—fu (DivisionofAnimalGeneticEngineering，ShanghaiKeyLaboratoryofAgriculturalGeneticsandBreeding； AnimalHusbandryandVeterinaryResearchInstitute，ShanghaiAcademyofAgriculturalSciences， Shanghai201106，China) Abstract：In orderto clarifytheappopoticpathwaysofMII—stageporcineoocytesaftervitrification，the Caspase3，Caspase8，Caspase9andPan-caspaseactivitiesofvitrifiedporcineoocytesindeathreceptormediated andmitochondrionmediatedapoptoticpathwaysweredeterminedbyinsitufluorescencestaining，andthemRNA expressionsofkeygenesindifferentpathwayswerealsodetectedbyRT．PCR．Theresultswereasfollows：After vitrification oftheMII—stageoocytesthefluorescenceintensityvaluesofCaspase8，Caspase9，Caspase3and Pan—caspasewererespectively32．03，16．56，16．70 and8．43，and significantlyhigherthan thoseofflesh oocytes’controlgroups(being4．02，4．83，4．23and3．08respectively)．Aftervitrificationtheexpressionle