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微生物发酵工程实验指导 王金华 实验规则 1、实验前必须预习实验指导书。若经提问发现没有预习者，须在教师指定的时间内预习完毕，方得参加实验。 2、实验前须认真检查仪器、试剂、用具及实验材料。如有破损、短缺应立即报告指导教师，经同意后方可调换和补充。对玻璃器皿须做好清洗工作。 3、实验过程中不得随便挪动外组的仪器、用具和实验材料。不得随意拨动仪器开关或电源开关，须按实验要求进行。 4、实验材料、药品的使用，应在不影响实验结果的前提下注意节约，杜绝浪费。 5、实验室应保持肃静，不得谈笑喧哗，不许搞其他动作，以免影响他人实验。 6、清洗仪器、用具、材料时，须将固形物倒入指定容器内，不得直接倒入水槽，以免造成水管堵塞。 7、实验过程中，须按操作规程仔细操作，注意观察试验结果，应及时记录。不得抄写他人的实验实习记录，否则，须重做。如有疑问，应向指导教师询问清楚后方可进行。 8、实验完毕后，须将玻璃仪器、用具等清洗干净，按原来的位置摆设放置。如有破损须报告指导教师，并填写仪器损坏登记簿。 9、在进行实验过程中，不得随意食用原料和加工品。 10、实验结束后，由值日生负责打扫实验室，保持室内整洁，注意关上水、电、窗、门。 实验一 培养基的配制及灭菌 一、实验目的要求 掌握不同类型微生物培养基的配方及其制备方法。 二、仪器设备及原材料 高压灭菌锅，250ml三角瓶，纱布，牛皮纸，琼脂，其他化学药品 三、常用培养基的配方及制备 1、细菌常用培养基 （1）LB培养基 蛋白胨 1.0% 酵母膏 0.5% NaCl 1.0% 可溶性淀粉 0.5% 琼脂 2.0% pH 7.0 121.3℃灭菌20min。 （2）MRS（乳酸菌分离） 牛肉膏0.5% 酵母膏0.5% 蛋白胨1% 葡萄糖1% 乳糖0.5% NaCl 0.5% 琼脂2% pH6.8 固体培养基加琼脂2%；半固体培养基加琼脂0.75% 2、酵母菌常用培养基 （1）麦芽糖培养基 蛋白胨1% 麦芽糖2% 酵母膏0.5% 琼脂2% 自然pH 121.3℃灭菌20min。 3、霉菌常用培养基 PDA（马铃薯蔗糖培养基） 去皮马铃薯200g切成小块，加水1000ml煮沸30min出汁，三层纱布过滤，滤液中加入2%蔗糖，补充水至终体积1000ml，加琼脂2%，自然pH。121.3℃灭菌20min。 四、实验中出现的问题及讨论 1、配制培养基操作过程中的问题。 2、培养基灭菌操作过程中的问题。 3、培养基灭菌后出现的异常现象，分析原因，讨论解决方法。 实验二 酸奶的酿制及乳酸菌的分离 一、实验目的要求 1、学习并掌握酸奶制作的基本原理和方法学习并掌握具有较高营养价值和特殊风味的发酵通过乳酸菌发酵牛奶中的乳糖产生乳酸，乳酸使牛奶中酪蛋白(约占全乳的2．9％，占乳蛋白的85％)变性凝固而使整个奶液呈凝乳状态。同时，通过发酵还可形成酸奶特有的香味和风味(与形成乙醛、丁二酮等有关)保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)和嗜热链球菌(Strep． tococcus thermophilus)、温度计全脂乳粉、砂糖、水 混合均匀 预热(60-70℃) 均质(15-18MPa) 灭菌(85-90℃，5-8min) 冷却(43-45℃) 接种 分装 封口 菌种 活化 母发酵剂 生产发酵剂 保温发酵(42-43℃，3-6h) 酸奶瓶 清洗 开水烫洗消毒 冷藏(2～5℃) 成品取出置冷藏2℃~6℃。 2、酸奶中乳酸菌的分离纯化 ⑴倒平板培养基：将分离用培养基完全融化并冷却到45℃左右倒平板，冷凝空白培养后备用。 ⑵稀释：将待分离的酸奶进行适当稀释，取一定稀释度的菌液做平板分离。 ⑶分离纯化：乳酸菌的分离可采用新鲜酸奶进行平板涂布分离，或直接用接种环蘸取酸奶作划线分离。分离后，置于37℃下培养以获得单菌落。 ⑷观察菌落特征：经2-3d培养，待菌落长成后，仔细观察并区别不同类型的乳酸菌。酸奶中的各种乳酸菌在马铃薯汁牛奶培养基平板表面通常呈现三种形态特征的菌落： ①扁平型菌落：大小为2-3mm，边缘不整齐，很薄，近似透明状，染色镜检为细杆菌； ②半球状隆起菌落：大小为1-2mm，隆起成半球状，高约0.5mm，边缘整齐且四周可见酪蛋白水解透明圈，染色镜检为链球状； ③礼帽形突起菌落：大小为1-2mm，边缘基本整齐，菌落中央呈隆起状，四周较薄，有酪蛋白透明圈，染色镜检呈链球状。 ⑸单菌株发酵试验：若将上述单