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非水介质的酶促反应 第四章 非水介质中的酶反应 第一节 有机介质中的酶促反应概述 第二节 有机介质中酶促反应的条件 第三节 有机介质对酶性质的影响 第四节 有机介质中酶促反应应用（生物能源） 第五节 超临界流体中的酶促反应 有机相酶催化历史 古代： Hill.A.C(1898)J.Chem.Soc,73,634-658 Kastlc,J.C.and LocvCnhart,A.a.(1900)Am Chem,J,24,491-525 Sym,E,A(1933)Biochem,Z,258,304-324 Sym,E,A(1936)Enzymologia 1,156-160 有机相酶催化历史 近代有机相酶催化研究再次起飞的里程碑 Zaks,A.and Kilbanov,A.M(1984),Science224,1249-1251 ZoKs,A. and Kilbanov,A.M.(1985),Proc.Natl,Acad,Sci.u.s.a.82,3192-3196 Klibanov 的实验 非水介质的组成 有机溶剂 超临界流体 气相介质 低共熔混合体系：两种或多种固体化合物混合而得到的具有一个最低共熔点的状态。 热点：介质工程、溶剂工程 改变反应介质来改变酶催化反应的选择性，从而达到人为的改变和控制酶的立体专一性。 第一节 有机介质中的酶促反应概述 一．有机介质酶反应的应用现状 二. 有机介质酶反应的优点 三. 有机介质酶研究热点 四. 有机介质酶反应具备条件 一 有机介质酶反应的应用现状 酶 催化反应 应用 蛋白酶 肽合成 合成多肽 酰基化 糖类酰基化 羟基化酶 氧化 甾体转化 过氧化物酶 聚合 酚类、胺类化合物的聚合 胆固醇氧化酶 氧化 胆固醇测定 醇脱氢酶 酯化 有机硅醇的酯化 一 有机介质中酶催化的应用 酶 催化反应 应用 脂肪酶 肽合成 青霉素G前体肽合成 酯合成 醇与有机酸合成酯类 转酯 各类酯类生产 聚合 二酯的选择性聚合 酰基化 甘醇的酰基化 二． 有机相酶反应的优点： 1． 有利于疏水性底物的反应，能催化在水中不能进行 的反应 2． 可提高酶的热稳定性. 3． 可改变反应平衡移动方向 4. 可控制底物专一性 5. 酶和产物易于回收。 6. 可避免微生物污染。 三. 研究热点 仿水溶剂和印迹技术 （1） 仿水溶剂体系 （2） 分子印迹技术 （1） 仿水溶剂体系 思路：水在酶催化反应中的作用（具有高介电常数和形成氢键的能力） 结论：有机溶剂可以替代部分水 （1） 仿水溶剂体系 概念 可用二甲基甲酰胺（DMF），乙二醇，丙三醇等极性添加剂部分或全部替代系统中的辅助溶剂水，从而影响酶的活性和立体选择性。称为仿水溶剂体系。 极性添加剂对体系的影响 a. 对反应体系内水的分配影响 b. 与蛋白质的直接作用 c. 对产物分配的影响 结论：作为辅助溶剂应该具有高介电常数和多点形成氢键的能力。 有机相生物印迹酶 有机相生物印迹酶 有机相生物印迹酶 概念： 酶在含有其配体的缓冲液中，肽链与配体之间的氢键等相互作用使酶的构象改变，这种新构象除去配体后在无水有机溶剂中仍可保持，并且酶通过氢键能特异地结合该配体，这种方法叫生物印迹。 利用酶与配体的相互作用，诱导、改变酶的构象，制备具有结合该配体及其类似物能力的新酶称为生物印迹酶 有机相生物印迹酶 为什么在有机相中会产生印迹现象？ 有机相生物印迹酶 水在酶催化反应中的作用 水直接或间接参与了酶天然构象中所有的非共价相互作用 水充当了酶结构的“润滑剂”，使酶分子的柔性增强 有机相生物印迹酶 有机相中刚性增强原因？ 四． 有机相酶反应具备条件 1． 保证必需水含量。 2． 选择合适的酶及酶形式。 3． 选择合适的溶剂及反应体系。 4． 选择合适pH值。 第二节 有机介质中酶促反应的条件 1． 保证必需水含量 2． 选择合适的酶及酶形式 3． 选择合适的溶剂及反应体系 4． 选择最佳pH值和离子强度 一 必需水 必需水 一 必需水 1 概念： 紧紧吸附在酶分子表面，维持酶催化活性所必需的最少量水称为必需水 2 ．干燥的酶水合过程： 溶菌酶为例： （1） 结合水量在0-7%g/g（水/酶）， （2）结合水量在7-25%g/g（水/酶）， （3）结合水量在25-38%g/g（水/酶）， （4） 酶分子表面完全水化，被一层水分子覆盖 2 ．酶活与水的关系： 酶活最大