九节菖蒲粗提物对变异链球菌体外作用探究.docVIP

九节菖蒲粗提物对变异链球菌体外作用探究 　　俞晓峰（1983-），男，医师，硕士，主要从事口腔内科学临床及基础的研究工作。 摘要：目的：研究九节菖蒲对变异链球菌体外生长、粘附的影响。 方法：以变异链球菌国际标准株ATCC25175作为实验菌株，用冷凝回流法提取九节菖蒲粗提物，二倍稀释法测定其最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentration，MIC）；再以不大于MIC的5个浓度梯度配制含药的TPY液体培养基2份，一份接种变异链球菌后将试管与地平面成30°角，厌氧培养后测定其吸光度值；另一份调定其初始pH为7.4，接种变异链球菌，厌氧培养后测定其终末pH。结果均用单因素方差分析，分析其统计学意义。 结果：九节菖蒲粗提物≥6.25mg/ml时即表现出明显的抑菌作用；当九节菖蒲粗提物≥0.78mg/ml时，对变异链球菌的体外粘附具有明显抑制作用。 结论：九节菖蒲粗提物对变异链球菌的体外生长、粘附均有一定的抑制作用。 关键词：九节菖蒲变异链球菌生长粘附 【中图分类号】R4【文献标识码】A【文章编号】1671-8801（2013）11-0005-01 九节菖蒲为毛莨科植物阿尔泰银莲花（Anemone altaica Fisch.ext C.A.Mey.）的干燥根茎，具有芳香开窍、醒神、散湿浊、开胃、解毒杀虫等功效[1]。本实验研究了九节菖蒲粗提物对变链菌的体外生长、粘附的抑制作用，现报道如下。 1材料与方法 1.1天然药物粗提取。九节菖蒲原药材购于福州市回春参茸行。药材在60℃烘箱烘干后用中草药粉碎机粉碎，取1000ml圆底烧瓶约40%体积容量的药物，80%乙醇浸过药材表面约2cm，浸泡过夜，然后冷凝回流至沸腾后1h，趁热过滤，第二、三次分别冷凝回流至沸腾后半小时，合并三次滤液后减压浓缩至膏稠状，保鲜膜包被后放置4℃冰箱。 1.2实验菌株及菌悬液制备。变异链球菌国际标准株ATCC25175由四川大学华西口腔医学院惠赠。菌株用TPY固体培养基复苏24h后传二代，涂片检查为纯培养后用无菌棉签取平板菌落，用无菌生理盐水在630nm波长处调节吸光度ABS为1.0，制成菌悬液备用[2]。 1.3九节菖蒲粗提物对变链菌的最小抑菌浓度（MIC）的测定。将九节菖蒲粗提物溶于含1%葡萄糖的TPY液体培养基中，按二倍稀释法使其终浓度达到50.00，25.00，12.50，6.25，3.13，1.56，0.78及0.39mg/ml。另配有菌无药的阳性对照组和有药无菌的阴性对照。0.1Mpa、121.5℃高压15min后分别接种体积比为10∶1的变链菌，80%N2，10%CO2，10%N2，37℃条件下厌氧培养48h。黑色背景下肉眼观察无细菌生长，即试管内液体清亮无混浊或沉淀生长的最低药物浓度即为该药物的MIC。 1.4九节菖蒲粗提物对变链菌体外粘附能力影响的测定。根据九节菖蒲粗提物对变链菌的MIC测定结果，选取MIC值作为母液浓度，配制含1%蔗糖的TPY液体培养基，用二倍稀释法稀释为5个浓度梯度，另设一个不含药液的对照组，每组4个平行管，各管中均加入5%蔗糖-0.5mol/L磷酸盐缓冲液（PBS）0.45ml。0.1Mpa、121.5℃高压15min后接种菌悬液0.05ml。各试管混匀，与地平面呈30°，厌氧箱中培养18h。然后将试管中溶液轻轻移去，将黏附到试管壁的细菌用PBS缓冲液洗脱，每次3ml，共计3次，然后以3500r/min离心15min，收集细菌，用3ml蒸馏水悬浮。用酶标仪测得630nm处吸光度，实验结果测定3次，结果取平均值，并计算粘附抑制率。粘附抑制率=（对照组OD630nm-实验组OD630nm）/对照组OD630nm×100%。 1.5统计学处理。采用SPSS11.5统计软件，各组总体均数之间比较采用单因素方差分析（Analysis of variance，ANOVA）；各样本组均数与对照组均数的比较采用Dunnettt检验（α=0.05）。 2结果 2.1九节菖蒲粗提物对变链菌的最小抑菌浓度（MIC）的测定。当九节菖蒲粗提物浓度不小于6.25mg/ml时，试管中液体清亮无沉淀，所以，九节菖蒲对变链菌体外生长的MIC值均为6.25mg/ml。 2.2九节菖蒲粗提物对变链菌体外粘附能力影响的测定。由表1可见，随着九节菖蒲、当归粗提物浓度的升高，粘附抑制率也随之增高，经统计学检验，各浓度组粘附的ABS值总体均数不全相等，经Dunnett t检验，当九节菖蒲粗提物浓度≥0.78mg/ml时，与对照组相比具有明显的抑制变链菌体外粘附作用。（九节菖蒲：F=276.24，P=0.00）。 3讨论 龋病是人类的常见病