银杏叶提取物对大鼠局灶性脑缺血后血管新生影响.docVIP

银杏叶提取物对大鼠局灶性脑缺血后血管新生影响 　　[摘要] 目的 探讨银杏叶提取物是否可以促进大鼠局灶性脑缺血后梗死周围区的血管新生，寻求促使脑缺血后血管新生、开发脑储备能力的有潜力的中医药疗法。 方法 采用线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）模型，术后24h采用银杏叶注射液以10mg/（kg体重d）的剂量连续腹腔注射治疗6d，于缺血后第7 d、14 天分别观察银杏叶组和对照组大鼠脑梗死体积、脑梗死灶周围血管密度（层粘连蛋白，Laminin的表达）和神经功能缺失评分的变化。 结果 与对照组比较，大鼠局灶性脑缺血后第7天和14 天银杏叶组的梗死体积明显减小，梗死周围血管密度较对照组明显增加，并显示出更好的神经功能评分（P 　　2 结果 2.1 梗死灶体积 TTC染色显示在所有缺血大鼠中，大脑皮层梗死灶局限在左颞顶皮层及其皮质下区。在MCAO术后7 d和14 d，银杏叶组较对照组的梗死体积明显减小，7d：（16.70±1.23）% vs （21.00±1.31）%；14 d：（12.80±1.47）% vs （17.30±1.35）%。见表1。 2.2 梗死灶周围的血管新生 Laminin（层粘连蛋白）是血管基膜的标志。缺血后银杏叶组laminin免疫反应性逐渐增加，缺血后第7天、14天皮层梗死灶周围的血管密度较对照组显著增加。见图1。 MACO术后7d和14 d，梗死周围皮层血管密度比较，银杏叶组比对照组明显增加，缺血后7d：（12.00±1.14）% vs （8.22±0.47）%，t=3.063，P=0.0155；14d：（10.28±0.62）% vs （7.16±0.41）%， t=4.196，P=0.003。 2.3 神经功能评分 与对照组比较，卒中发生后7d和14d银杏叶组显示更好的神经功能评分，缺血后7d：（1.60±0.16） vs （2.50±0.17），14d：（0.50±0.17） vs （1.50±0.17）。见表2。 3 讨论 近年来，我国的脑卒中发病率呈明显上升趋势，其中缺血性卒中占脑卒中的60%～80%。在缺血性脑卒中的治疗方面，人们越来越多地把目光投向了人体内源性的脑储备能力。其中，侧支循环储备中的血管新生能力因具有无限的潜力成为研究者关注的焦点。1994年，Krupinski等[3]对10例存活5～92d的脑梗死患者的脑组织切片进行研究，证实了缺血脑组织中微血管密度增加，且在卒中后7d即出现，其模式与正常脑组织的血管网非常相似。2006年美国的一项观察MCAO后募集骨髓干细胞的研究进一步证实，缺血侧会出现血管新生[4]。既然人体自身存在代偿性的血管新生以改善缺血区的供血，人们便试图给予外源性刺激激发人体的这一功能，治疗性血管新生（therapeutic angiogenesis，TAG）即应运而生。目前在心肌缺血和其他外周缺血性疾病中，治疗性血管新生已进入临床试验阶段甚至临床应用阶段。由于缺血性脑卒中的特殊性，目前治疗性血管新生还仅处于动物实验阶段。目前，治疗性血管新生的研究主要集中在对血管生成因子，如血管内皮生长因子（VEGF）、成纤维细胞生长因子-2（FGF-2）等的应用上。但由于血管生成因子自身成分或基因治疗中某些载体成分的安全性问题，血管生成因子的应用还存在一定的风险：在诱导血管性新生的过程中可能促进肿瘤的生长；VEGF可能会引起糖尿病视网膜病变患者的视力衰退；病毒载体具有毒性及会引起炎症性免疫反应等。为了避免这些风险，科学家们想到了另外的途径，就是通过给予刺激或药物促进血管生成因子的产生。已有研究发现他汀类药物可显著提高内源性VEGF水平，并增加循环中血管内皮祖细胞的数量而促进血管生成[5]。但其在急性卒中的疗效和安全性尚未得到证实。而祖国传统医学――中医药由于具有良好的安全性而成为治疗性血管新生研究中的热点。 银杏叶提取物是从银杏叶中分离纯化的提取物，因其作用范围广且不良反应少而在缺血性心脑血管病的治疗中得到广泛应用。EGb中的有效成分主要是黄酮苷类和萜类，它具有众多的药理作用：清除氧自由基、抑制脂质过氧化反应、拮抗血小板活化因子（PAF）、调节血管活性和增加血流量、降脂等。研究表明，脑缺血后EGb可以通过减轻线粒体功能衰竭、降低谷氨酸等毒性物质的释放、减少继发性神经细胞死亡/凋亡等机制起神经保护作用，同时还有助于脑血流的恢复和减轻脑水肿[6-9]。但目前尚未见到有EGb应用于脑缺血后治疗性血管新生的研究。关于银杏叶提取物与血管生成的关系，自1994年起已逐渐发现并证明EGb可以抑制血管生成、用于肿瘤的治疗[10]。这是否意味着EGb不能用于促进血管新生呢？随着脑缺血后治疗性血管新生研究和中医络病理论的发展，人们提出了