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马蔺不同生长阶段嫩叶POD与EST同工酶研究 　　摘要： 利用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，检测了11份不同居群马蔺种质材料叶片过氧化物酶（POD）、酯酶（EST）同工酶的2个酶系统22个同工酶位点，分析马蔺营养生长和生殖生长阶段的同工酶变化。结果表明，11份马蔺种质叶片共有13种POD酶带，9种EST酶带，其中,基本谱带8条，特征谱带4条；与生殖生长阶段相比较，马蔺营养生长阶段EST酶谱的酶活性较强，酶谱表现也较清晰；生殖生长阶段POD酶谱的酶活性比营养生长阶段强，酶谱表现也较清晰；营养生长阶段的嫩叶适合用于马蔺EST分析，生殖生长阶段嫩叶适宜选用POD分析。 关键词： 马蔺；营养生长；生殖生长；POD；EST 中图分类号： S 682.1；Q 814.9文献标识码： A文章编号： 1009?5500(2011)06?0007?07 马蔺（Iris lactea）系鸢尾科鸢尾属多年生草本植物，广泛分布我国华北、西北、东北、华东和青藏高原等地。生长在较低湿的盐碱滩地以及高山河谷地区，可称为优势单纯的群落，尤以过度放牧的盐碱化草地上较多，而在重盐渍化和地下水位较深的干燥环境较少。马蔺具有耐盐碱、耐粗放管理、抗旱抗寒性强等特点，花色淡雅、叶色泽青绿柔软厚实、病虫害少、修剪频率少，是优良的生态观赏地被植物，在绿化、水土保持、植被恢复等方面具有开发潜力[1，2]。近年来，科学工作者对马蔺的研究集中在形态结构特征与地理分布关系、破除种子休眠、提高发芽率、抗旱抗寒性、耐盐碱能力及其他抗逆性鉴定、引种及驯化和栽培、组织培养和繁殖推广等方面[3]，而关于马蔺种质材料遗传多样性方面的工作报道较少[4，5]。 酶是基因表达的产物，酶蛋白多肽链结构中的氨基酸顺序是由DNA上结构基因所携带的遗传信息决定的，而同工酶分析是通过电泳技术把酶蛋白分子分离，然后通过组织化学特异性染色将其位置和活性直 收稿日期： 2011?04?15； 修回日期： 2011?05?05 基金项目： 北京市自然科学基金项目（6102013）资助 作者简介： 李强栋（1984?），男，甘肃景泰人，在读硕士。 E?mail：gsliqd@163.com 孟林为通讯作者。 接在染色区带以酶谱形式标记出来。因此，通过对酶谱分析就能识别控制这些谱带所表达的基因，从而在生化水平上研究植物体遗传变异[6，7]。1980年Brewbaker等对玉米（Zea mays）同工酶电泳发现，玉米中过氧化物酶同工酶存在不同组织及不同生长阶段的多型现象[8]，之后关于植物不同组织器官、不同生长阶段同工酶差异性已有较多报道，而且不同种类同工酶具有生长阶段和组织特异性[9，10]。 以采自我国北方5省区11份野生马蔺为实验种子，繁殖后分别于营养阶段和生殖生长阶段随机选取其健康功能叶用于同工酶分析，通过分析营养生长阶段及生殖生长阶段的POD和EST（POD，E.C.；EST，E.C. ）酶谱特征的变化，探讨2种同工酶的多种分子形式在不同居群间的表型特征与遗传结构之间的连续性、稳定性及变异性，酶蛋白的多种分子形式所具有生长阶段特异性及不同组织器官特异性。以期在生化水平上，为利用同工酶技术分析马蔺种质材料遗传多样性提供理论数据。 1材料和方法 1.1实验材料来源 以采集的我国北方5省区不同生境分布的11份野生马蔺种子为实验材料（表1）。 表1实验马蔺种质材料及其来源 Table 1Source of tested germplasms 材料序号编号生境采集地1BJCY?ML001果园田边, 壤土北京海淀区四季青乡2BJCY?ML004羊草、马蔺、杂类草等组成的轻度盐化低地草甸吉林省西部3BJCY?ML005羊草、绣线菊草甸草原, 砂壤土内蒙古赤峰阿鲁科尔沁旗4BJCY?ML006荒漠草原、公路旁, 砂砾质山西太原市5BJCY?ML008盐化低地草甸, 盐渍化草甸土, 砂砾内蒙古鄂尔多斯西部6BJCY?ML011公路边盐碱荒地, 盐碱土内蒙古临河八一丰收村7BJCY?ML012藜科植物、马蔺等组成的盐化低地草甸内蒙古临河隆胜乡新明村8BJCY?ML013多年生禾草、马蔺等组成的盐生草甸内蒙古临河城关镇万来村9BJCY?ML014盐化低地草甸, 砂砾质内蒙古临河双河乡丰河村10BJCY?ML015盐碱化较强的盐化低地草甸, 砂砾质新疆伊犁州昭苏县11BJCY?ML018干旱荒漠草原带, 公路边, 砂壤土内蒙古呼和浩特市大青山1.2实验方法 1.2.1日光温室将收集到的不同生境马蔺种子，于2009年在北京市农林科学院草业中心日光温室种子繁殖，幼苗培育之后移栽大田管理。育苗时在内径21 cm，高18 cm的花盆装入3 kg