HPLC测定通关藤药材和消癌平片中通关藤苷A含量.docVIP

HPLC测定通关藤药材和消癌平片中通关藤苷A含量 　　摘要：目的 建立通关藤药材及消癌平片中通关藤苷A的高效液相色谱含量测定方法。方法 色谱柱：Sinochrom ODS-BP分析柱（250 mm×4.6 mm，5 ?m）；流动相：乙腈-0.1%磷酸（41∶59）；检测波长：230 nm。结果 通关藤苷A在0.996～19.92 ?g范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系，r=0.999 95，平均加样回收率为96.6%，RSD=2.19%（n=6）。结论 本方法操作简单，结果准确，稳定性和重复性好，可用于通关藤药材及消癌平片的含量测定及质量控制。 关键词：通关藤；消癌平片；通关藤苷A；高效液相色谱法 DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2013.03.021 中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）03-0055-03 通关藤，又名乌骨藤、通光散、通光藤等，是萝?科牛奶菜属植物通关藤Marsdenia tenacissima（Roxb）.Wight et Arn的干燥茎、藤[1]，主要分布于贵州、云南、广西等地。通关藤含有多种化学成分，包括C21甾体苷类、三萜皂苷类、多糖类、醇类、挥发油、生物碱、有机酸类等化学成分。消癌平片是由通关藤制成的单方制剂，具有清热解毒、止咳平喘、散结止痛、抗癌之功效[1]。通关藤提取物在体外对胃癌、肝癌、食管癌等癌细胞具有抑制作用[2-4]。已有研究表明，C21甾体皂苷类为通关藤中主要抗肿瘤成分[5]。然而，目前文献报道的消癌平制剂多以绿原酸的含量为评价指标。本研究拟建立通关藤苷A的高效液相色谱（HPLC）含量测定方法，为规范通关藤药材及其制剂的质量提供依据。 1 仪器与试药 Agilent1100高效液相色谱仪，包括Agilent G1321A四元泵、G1322A真空在线脱气机、G1313A自动进样器、G1315 DAD二极管阵列检测器、Agilent安捷伦化学工作站；KQ3200DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；BP211D电子天平（德国赛多利斯公司）。 通关藤苷A对照品（纯度≥98.3%），山西省中医药研究院方剂研究所自制。5批消癌平片（批号091220、091221、091222、091224、091227），江苏天禾制药有限公司生产。乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。 通关藤药材经山西省中医药研究院李先荣主任药师鉴定。采收时间及产地见表1。 2 方法与结果 2.1 供试品溶液的制备 取通关藤药材过60目筛粉末1 g，精密称定，置于锥形瓶中，加入40 mL甲醇，超声30 min（功率150 W，频率40 kHz），滤过，滤液浓缩，定容于10 mL量瓶中，即得通关藤药材供试品溶液。 称取消癌平片20片，去包衣，精密称定，碾细，取2.4 g粉末，加120 mL蒸馏水于烧杯中溶解。滤过，滤液用氯仿萃取3次，每次30 mL，收集氯仿层，合并萃取液，水浴蒸干，甲醇定容至5 mL，即得消癌平片供试品溶液。 2.2 对照品溶液的制备 称取通关藤苷A 10 mg，精密称定，置于10 mL量瓶中，用甲醇溶解，定容，即得0.996 mg/mL对照品溶液。 2.3 色谱条件 色谱柱：Sinochrom ODS-BP分析柱（250 mm×4.6 mm，5 ?m）；流动相：乙腈-0.1%磷酸（41∶59）；检测波长：230 nm；进样量：10 ?L；柱温：室温。理论塔板数按通关藤苷A峰计算应不低于1 500。通关藤苷A峰型良好，色谱图见图1。 2.4 标准曲线的绘制 分别精密吸取通关藤苷A对照品溶液1.0、2.5、5.0、10.0、15.0、20.0 ?L，注入高效液相色谱仪，依法测定，以通关藤苷A进样量（?g）为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，进行线性回归，得回归方程Y=441 389X-62.216，r=0.999 95。结果表明，通关藤苷A进样量在0.996～19.92 ?g范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。 2.5 精密度试验 精密吸取上述对照品溶液10 ?L，注入高效液相色谱仪，重复进样6次，测定峰面积。结果RSD=0.13%（n=6），表明仪器精密度良好。 2.6 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液10 ?L，注入高效液相色谱仪，分别于0、2、4、8、16、24 h测定峰面积。结果RSD=1.16% （n=6），表明供试品溶液在室温下24 h内稳定。 2.7 重复性试验 取同一产地通关藤药材1 g，6份，按“2.1”项下方法制备供试品溶液，分别精密吸取各供试品溶液10 ?