一株刺参益生菌的发酵配方及其发酵条件优化.PDF

《渔业现代化}2012年第 39卷第 3期 一 株刺参益生菌的发酵配方及其发酵条件优化 元福杰 ，王印庚 ，廖梅杰 ，张 正 ，潘鲁青 ，张述智 (1中国海洋大学水产学院，青岛 266003；2中国水产科学研究院黄海水产研究所，青岛266071； 3青岛中仁药业有限公司，青岛266329) 摘要：以健康刺参肠道的益生菌——枯草芽孢杆菌 (Bacillussubtilis)为研究对象，以豆粕、葡萄糖和氯化钠为 基础发酵培养基，通过单因素和正交试验，确定该菌株适用于工业生产的最佳发酵培养基配方；通过单 因素 试验，确定最佳发酵条件；同时在生物反应器中进行扩大培养试验，得到其最佳种龄和发酵时间。试验确立 该菌株的最佳培养基配方为：氯化钠 10g／L，葡萄糖2．5g／L，豆粕20 L；最佳发酵条件为：培养温度 28℃， 初始pH7．5，转速 170r／min，菌种接种量5％。以最佳发酵条件和培养基，在 10L生物反应器中进行扩大培 养试验，得到最佳种龄为24h、最佳发酵时间为32h，菌体细胞浓度最高达到8．5x10 cfu／mL，芽孢生成率 达到9l％。研究结果为刺参微生态制剂的工业化生产提供基础数据，为海水养殖专用微生态制剂的开发提 供参考。 关键词：刺参；益生茵；枯草芽孢杆菌；发酵工艺 doi：10．3969／j．issn．1007-9580．2012．03．008 中图分类号 ：$917．1 文献标识码 ：A 文章编号：1007-9580(2012)03-040-06 近年来，我国海水养殖业蓬勃发展，为沿海 健康发展 J。由于刺参特殊的生活习性和养殖 农村经济的发展做出了巨大贡献，但随着集约化 特点，同时抗生素和疫苗等疾病预防措施本身又 养殖模式的日益扩大，养殖病害频发 l 。长期以 存在一些限制性，故采用微生态制剂是防止刺参 来，水产病害防控主要依赖抗生素和化学药品，由 疾病发生的有效措施之一。虽然市场上已有多种 此带来的耐药性和药物残留问题对食品安全构成 有益菌产品，但多为国外进 口或陆源性菌株，目前 了严重的威胁 。因此，研发无公害的病害防控产 尚未有来源于刺参或其养殖环境的益生菌株生产 品已成为当前水产动物病害防控的主流方 向。其 微生态制剂的报道。 中，微生态制剂因其具有绿色环保、无毒副作用、 1 材料和方法 无残留污染等优点将成为抗生素最有潜力的替代 口 [3-5] 日日 。 1．1 试验材料 刺参 (Apostichopusjaponicus)，属无脊椎动物， 试验菌株 选用从健康刺参肠道分离获得的 棘皮动物门(Echinodermata)，海参纲 (Holothu— 菌株，经鉴定为枯草芽孢杆菌 (Bacillussubtilis)， roidea)，仿刺参属 (Apostichopus)，具有极高的营 菌种保藏号为CCTCCM2010316。 养和药用价值。进人21世纪以来，其养殖规模不 培养基成分 种子培养基：胰蛋白胨 17 L， 断扩大，成为我 国海水养殖单品种产值最高的种 植物蛋白胨3 L，氯化钠20g／L，磷酸氢二钾2．5 类之一。近年来，由于刺参高密度养殖和不规范 L，葡萄糖2．5 L，121℃灭菌 20min，初始 pri 运作，刺参养殖出现了免疫力下降、病害频发、大 7．5；发酵培养基成分：豆粕，葡萄糖，氯化钠，121 规模死亡等问题，严重制约了刺参养殖业 的持续 ℃灭菌20rain。 收稿 日期：2012-05-03 修回日期：2012-05-23 基金项 目：科研院所技术开发研究专项(2011EG34219)；山东省农业 良种工程重大课题 “速生、抗病