(课件)-项目2：微生物发酵技术任务1：微生物菌种筛选与保藏.ppt

项目2：微生物发酵技术 任务1：微生物菌种筛选与保藏;教学安排： 1. 员工培训 由老师讲解理论基础。 分配实操任务(菌种筛选与保藏)。 ; 2. 学生模拟组建运营一个菌种保藏服务机构，撰写计划书(在理论教学期间完成)。 市场部：菌种保藏的适用范围，市场需求调查，服务推广方案。 技术部：保藏技术的选择、制定相关技术的操作规程。 品控部：制定菌种保藏质量的标准及检测方法。 总经理：协调监督各部工作，最后拿出完整的计划书。; 3. 计划书实施。 计划书要先经过老师的审核，然后实施。 实施过程中考核操作技能。 实施后及时进行实训报告的撰写也总结。 ;;选育方法： 1 自然选育； 2 诱变育种； 3 原生质体技术； 4 杂交育种； 5 分子生物学方法。;第一节 自然选育 自然选育是一种纯种选育的方法，纯化复状之功效，也可选育正突变株。 一 菌种退化与变异的原因 1 遗传基因型的分离； 2 自发突变的结果； （1）用沙土管长期保藏； （2）菌种连续传代； （3）活细胞内的新陈代谢；; ;二 自然选育的方法;第二节 诱变育种 一 突变诱发过程 （一）诱变剂接触DNA分子前； （二）DNA损伤的修复； 1 光复合修复； 2 切补修复； 3 重组修复； 4 SOS修复系统； 5 DNA多聚酶的校正作用。;（三）从前突变到突变 经过修复系统后继续保留的突变。 增强诱变效果的方法： 1 抑制修复的酶系统； 2 使诱变的基因处于活性状态。 （四）从突变到突变型 表型延迟： 表型的改变落后的基因型的改变。 1 分离性延迟； 2 生理性延迟。; ;2 筛选过程 （1）传种斜面； （2）留种保藏； （3）筛选高产菌株。 三 突变的诱发 （一）出发菌株的选择 （1）选择纯种； （2）选择具有优良性状的出发菌株；;（3）对诱变剂敏感。 （二）诱变剂的选择 （1）多种诱变剂轮换使用； （2）最适剂量。 （三）影响诱变效果的因素 （1）菌种的生理状态； （2）处理前后的培养条件。;四　突变株的筛选;　　;1 初级代谢产物高产菌株的筛选； （1）降低终产物浓度 ①筛选终产物营养缺陷型； ②筛选细胞膜透性改变的突变株。 (2)筛选抗反馈调节突变株 ①筛选结构类似物抗性突变株； ②利用回复突变筛选抗反馈突变菌株。;2 次级代谢产物高产菌株的筛选 次级代谢产物产生的条件： 共同的前体与营养不平衡。 (1)利用营养缺陷型筛选 芳香族氨基酸与氯霉素有共同的凝胶体莽草酸，选育芳香族氨基酸缺陷型，有利于积累氯霉素。 脂肪酸与制霉菌素、四环素、灰黄霉素有共同的前体丙二酰CoA。 渗漏缺陷型：遗传性障碍不完全的营养缺陷型。;(2)筛选负变株或零变株的回复突变株 (3)筛选去磷酸盐调节突变株 ①筛选能在磷酸盐抑制浓度下，正常产生抗生素的突变株； ②筛选磷酸盐结构类似物抗性突变株。 低亲和力的磷酸盐转运系统I； 高亲和力的磷酸盐转运系统II。 (4)筛选去碳源分解代谢调节突变株 解除葡萄糖效应(去葡萄糖分解代谢调节突变株毒性结构类似物抗性突变株)。; 筛选淀粉酶活性高的突变株。 (5)筛选氨基酸结构类似物抗性突变株 许多抗生素和氨基酸有共同的前体或者有些氨基酸本身可以作为某些抗生素的前体。 例：半胱氨酸和缬氨酸是青霉素母核。 (6) 筛选二价金属离子抗性突变株 (7) 筛选前体或前体结构类似物抗性突变株 前体或前体结构类似物对菌体生长有抑制作用。;前体：自身不能合成； 自身能合成，但产量低； 自身能合成，但有反馈调节作用。 (8)筛选自身所产的抗生素抗性突变株 ;第三节 生产菌种的保藏 ;一、菌种保藏的目的与原理;菌种保藏;菌种保藏;(二)、菌种保藏;(一)低温保藏法 ;(二)低温定期移植法 ;(二)低温定期移植法;(三)液体石蜡封存法 ;(三)液体石蜡低温封存法;(四)干燥保藏 ;1.沙土管法;1.沙土管法;1.沙土管法;1.沙土管法;2.滤纸保藏法 ;3.大(小)米保藏法 ;(五)甘油管保藏法;(六)真空冷冻干燥法 ;(六)真空冷冻干燥法;(六)真空冷冻干燥法;(六)真空冷冻干燥法;(六)真空冷冻干燥法;(六)真空冷冻干燥法;(六)真空冷冻干燥法;(六)真空冷冻