微生物检验教学课件（扬州大学）第十四节 空肠弯曲菌检验.pptVIP

第十四节 空肠弯曲菌的检验（ Campylobacter jejuni） 空肠弯曲菌是当今世界上大多数地区常见的腹泻病原菌，它在人类腹泻病中的感染比例不亚于沙门氏菌和志贺氏菌，在肠道致病菌中占有很重要位置。 该菌也是人畜病原菌，可引起人类的腹泻、败血症，也可引起牛、羊、猫、犬、猴等发病。 弯曲菌属的特征 弯曲菌为螺旋屈曲（一个或更多个螺旋），G–，多形态杆菌。具单极毛，有时两端各有一鞭毛，能在粘稠环境中，如肠粘液内快速运动，作飞镖式或穿梭状的活泼运动。0.2?0.5?m?0.5?5.0?m 从微需氧到厌氧，对O2最佳需要量为3%?5%，H2可刺激生长。 不分解碳水化合物，即O/F试验为阴性，氧化酶阳性 。 对胎儿弯曲菌和空肠弯曲菌的致病性目前研究的最清楚 分类：包括5个正式种 胎儿弯曲菌 胎儿亚种 性病亚种 唾液弯曲菌 唾液亚种 牛亚种 粘液亚种 空肠弯曲菌 结肠弯曲菌 简洁弯曲菌 培养特性 对微需氧条件要求较高，最适生长条件为5%O2、10%CO2、85% N2 生长温度 空肠弯曲菌 42~43 ℃ 胎儿弯曲菌 25~37 ℃生长，42 ℃不生长 生长pH约为7.0~7.2 营养要求较高 空肠弯曲菌 选用改良Camp-BAP琼脂（弯曲菌血琼脂平板）或Skirrow琼脂 胎儿弯曲菌 选用血培养基和布氏琼脂 样品的采集及处理 不论那种食物样品都应尽快交付检验。如果样品必须运送和保存，应当使用Cary-Blair半固体培养基。弯曲菌的存活时间取决于温度，在25℃情况下，其存活时间不到24h或更少，因此样品在原始分离前需放冰箱或冷处保存。　 　微需氧条件的制备 1. 带有双相压力计(可表示正负压的)的厌氧罐：在装皿密封后，先抽去罐内空气至负压7.3×104Pa(550mmHg)处，输入上述三种混合气体使罐内压力恢复于零；再将罐内气体抽至负压7.3×104Pa(550mmHg)，同样输入上述气体至零，即可放置温箱培养。 2. 气袋法：操作时只使用气体发生剂而不加催化剂。 3. 双平板法：取两块平板，一块平板接种已知的兼性厌氧菌(如变形杆菌)，另一块平板接种样品，去掉皿盖，将含琼脂的两只皿相对合齐并用胶布粘封，放入密封不漏气的罐内(或袋内)进行培养。由于兼性厌氧菌生长的代谢作用，可使小环境中的氧气浓度下降和二氧化碳浓度上升。 4. 蜡烛缸法: 将已接种细菌的平板置于容量2000mL的磨口标本缸或干燥器内。缸盖及缸口涂以凡士林，放入小段点燃蜡烛于缸内(勿靠近缸壁，以免烤热缸壁而炸裂)，盖密缸盖。缸内燃烛约于0.5～1min，因氧减少自行熄灭，此时容器内约含二氧化碳5%～10%。最后连同容器一并置于42±1℃温箱中培养。 改良Camp-BAP培养基 基础成分 胰蛋白胨 10.0 g 蛋白胨 10.0 g 葡萄糖 1.0 g 酵母粉 2.0 g 氯化钠 5.0 g 焦亚硫酸钠 0.1 g 琼脂粉 15.0 g 蒸馏水 1000ml 硫乙醇酸钠 1.5g 添加成分 万古霉素 10 mg 多粘菌素B 2500 IU 两性霉素B 2 mg 头孢霉素 15 mg 脱纤维羊血 50ml Cary-Blair氏运送培养基 成分 硫乙醇酸钠 1.5 g 磷酸氢二钠 1.1 g 氯化钠 5 g 琼脂粉 5 g 蒸馏水 1000 ml 1%氯化钙溶液 9 ml pH 8.4 除氯化钙外，其它均按上述成分配置，加热溶解。冷至50℃，加入氯化钙溶液，校正pH至8.4.分装试管，每支5ml,121℃，15min灭菌。 改良skirrow琼脂 冻溶马血的制备： 将马血冷冻过夜，次日融化，使红细胞溶解而成 TMP抗生素混合液配制法： 先配成乳酸TMP溶液，以乳酸2滴与100 ml蒸馏水混合，然后加入100 mg TMP即成乳酸TMP溶液。 取乳酸TMP溶液5 ml，在加入万古霉素10 mg和多粘菌素B 2.5 mg，摇匀后，即成TMP抗生素混合液 分离培养 拭子或液体可直接在选择性培养基如改良Camp?BAP布氏杆菌培养基或使用skirrow氏培养基平板上划线接种。于42℃培养48h后，观察可疑菌落。 第一型菌落不溶血，灰色、扁平、湿润、有光泽，看上去像水滴，有从接种线向外扩散的倾向；第二型菌落也不溶血，常呈分散凸起的单个菌落(直径为1?2 mm)，边缘完整、发亮。 初步鉴定 将可疑菌落做氧化酶和过氧化氢酶试验，如为阳性，则涂片做革兰氏染色。本菌为革兰氏阴性菌，大小为0.3?0.4?m