细胞分子生物学（扬州大学）第十五章 RNA加工及核糖核蛋白复合体.pptVIP

第十五章  RNA的剪接加工 基本概念 多数新转录的RNA分子(初级转录子)都需经过不同的改变才能成为成熟的RNA，此过程称为RNA加工（RNA processing) 最常见的RNA加工方式包括： 利用核酸内切或外切酶进行的核苷酸去除 向初级转录子或其裂解产物末端添加核苷酸 某些核苷酸的化学修饰 一、原核rRNA的加工 大肠杆菌基因组共有7个散在的rRNA操纵子，每一操纵子含各有一个拷贝的5S、16S和23S rRNA序列，在tRNA编码序列之间也存在rRNA操纵子 至少有7种RNA酶（RNAase）参与前体rRNA的加工 二、真核rRNA的加工 许多真核细胞的rRNA基因以串联重复的基因丛方式存在，每基因丛的转录单元拷贝数100个，由RNA聚合酶I负责转录 真核rRNA加工的具体步骤不很清楚，前rRNA分别各含1个拷贝的18S、5.8S和28S编码区 真核细胞的5S rRNA由RNA Pol III从非连锁基因转录产生 三、原核细胞的核糖体 核糖体分别占据大肠杆菌干物质的25%、总蛋白的10%和总RNA的80%，可见核糖体对细胞的重要性 70S的核糖体包括1个50S和1个30S亚单位 50S包括1个23S rRNA、1个5S rRNA 和31个蛋白质分子 30S亚单位包括1个16S rRNA和21个蛋白质分子 四、 真核细胞的核糖体 80S核糖体由1个60S亚基和1个40S亚基组成 60S亚基包含约45种蛋白、1个5S rRNA分子、1个5.8 S rRNA及1个28S rRNA分子 40S亚基包含18S rRNA和约30种蛋白 第二节tRNA的加工 原核生物和真核生物刚转录生成的tRNA前体一般无生物活性，需要进行以下步骤： ①剪切和拼接； ②碱基修饰； ③3-OH连接-ACC结构 第三节mRNA的加工 一、原核mRNA的加工 原核mRNA转录子一般不需要加工，在其合成尚未完成之前，核糖体即开始装配和蛋白质转译 原核mRNA的降解速度很快，转录子的转译时间非常有限，但若5-或3-端有干-环结构保护，转录的时间则相对较长 二、真核mRNA的加工修饰 所有真核蛋白编码基因都由RNA聚合酶 II负责转录，转录子的长度差异很大，统称为异源核RNA（heterogeneous nuclear RNA, hnRNA） 其中能被加工成mRNA的转录子叫做前mRNA（pre-mRNA） 加工过程包括5?-帽形成、3?-多聚腺苷酸化、内含子剪接和碱基修饰 前mRNA合成后很快被蛋白质包裹成异源核蛋白体（hnRNP），参与包裹的蛋白质分别被命名为hnRNP 蛋白A-U 从细胞核提纯的包裹蛋白为相当均质的颗粒，称为hnRNP颗粒 hnRNP使hnRNA保持单链形式，协助RNA加工 （一）5?端加帽 在前mRNA链长度达25-30nt前，其5?-端以添加7-甲基鸟苷（m7G）方式进行化学修饰，这种5?-结构称为5?-帽 加帽反应由鸟苷转移酶催化，随后在第一和第二个核苷酸上可能发生的糖基甲基化，特别是脊椎动物 帽结构对转录子具有稳定作用，对RNA剪接、核运输和转译等过程也具有重要作用 （二）3?端多聚腺苷酸化 绝大多数真核mRNA的成熟3?-端都发生多聚腺苷酸化，即添加一串A碱基，也称3?-端加尾 加尾部位由特定的序列决定，包括5-AAUAAA-3（多聚腺苷酸化信号）、5-YA-3（Y代表嘧啶）序列和下游的GU富含序列，统称为多聚腺苷酸化部位 反应需要许多蛋白因子的参与，先在特定部位发生裂解反应，然后由poly（A）聚合酶将约250个A碱基加到裂解产物的3’-端 poly（A）尾有助于mRNA分子的稳定和成熟mRNA的转译 在分子生物学实验中，poly（A）尾为mRNA的分离提取、cDNA合成和RT-PCR检测提供了很大方便 （三）RNA剪接 RNA剪接（splicing）：指真核细胞将前mRNA中的内含子切除，并将外显子拼接的过程，反应在细胞核内进行，产生的成熟mRNA转运到细胞浆进行转译 剪接部位由特定序列决定，几乎所有内含子的5 ? -端为GU（剪接供体部位），3?-端为AG（剪接受体部位），其他序列有富含嘧啶碱基的多嘧啶轨和分支点 剪接反应分两步进行，第一步裂解反应发生在5?-剪接部位，第二步裂解发生在3-剪接部位，当两个外显子被连接在一起后，内含子以套索形式释放降解 （四）mRNA的可变（选择性）剪接 定义：通过不同的剪接方式从一个mRNA前体产生不同的mRNA的过程，是调节基因表达和产生蛋白质组多样性的重要机制，受多种顺式作用序列和反式作用因子相互作用调节 分类： 选择性利用启动子 选择性利用poly（A）部位 选择性保留内含子 选择性利用外显子 * 第一节核糖体RNA (rRNA)的加工 31种