免疫化学诊断技术的进展.pptVIP

利用抗原抗体反应和分离技术测定(量)与疾病有关的化学分子。 免疫同位素标记測定法 化学发光法 酶联化学发光 偏振荧光 时间分辨荧光 电化学发光 直接化学发光 免疫同位素标记測定法 放射免疫法已有30多年历史。比较其它传统的方法，它有特异性好，灵敏度高，准确性好，可靠性强等特点，故在临床科研上广泛使用。 免疫同位素標記法之局限 半衰期短 ； 試劑批內与批間差异大； 反應過程長； 靈敏度有限； 放射性廢物的處理； 免疫化学发光法 酶联化学发光 偏振荧光 时间分辨荧光 电化学发光 直接化学发光 免疫化学发光法简介 - 酶联化学发光 (EMCLIA) 原理： 抗体包被的塑料固相 加入待测样本 - 抗原 加入碱性磷酸酶标记的抗体 洗 加入底物 - 4-Mup, 发光 产品： 雅培Axsym, 梅里埃Vidas, 强生Vitros, DPC Immulite 2000, 罗氏ES300 免疫化学发光法简介 - 偏振荧光 (FPIA) 原理： 標記在小分子抗原上的熒光素經485nm的激發偏振光照射後，發出光子，經過偏振儀形成525~550nm的偏振光； 這一偏振光的強度與熒光素受激發時分子轉動的速度呈反比，游離的熒光素標記抗原，分子小，轉動速度快，激發後發射的光子散向四面八方，因此偏振光信號弱； 在測定過程中待測抗原小分子，熒光標記抗原小分子和特導性沆體大分子同時加入到一反應杯中，待測抗原越少，與抗體競爭結合的量越少，而熒光標記抗原與抗體結合就越多，而熒光標記的小分子抗原與大分子抗體結合後，其分子的轉動速度減慢，由此熒光偏振信號強。 产品：雅培Axsym 免疫化学发光法简介 - 时间分辨荧光 (TRFIA) 原理： 标记物为三價稀土離子如：銪 (Eu3+)、釤(Sm3+)、鏑(Dy3+)和鋱(Tb3+)等，它們可利用具有雙功能基團結構的螫合劑，在水溶液中與抗原分子以共軛雙鍵結合，形成稀土離子—螫合劑—抗原結合物。 當標記稀土離子的抗原與待測抗原共同與抗體競爭結合，形成抗原抗體免疫復合物，其中含有標記稀土離子，然後利用時間分辨熒光分析儀，可測出復合物中稀土離子發射熒光的強度，以此確定待測抗原的含量。 产品： EGG的DELFIA 免疫化学发光法简介 - 电化学发光 (ECLIA) 原理： 先將特异性抗體包被在磁性微珠。另外將發光劑[Ru (bpy)3]2+標記在特异性抗體上。 將待測樣本與包被抗體的磁性微珠和發光劑標記的抗體共同溫育，形成磁性微珠包被抗體—抗原—發光劑標記杭體復合物。 加入TPA緩沖液和TPA在電極表面進行電子轉移，產生電化學發光。 产品： 罗氏Elecsys 原理：利用化學發光技術和磁性微粒子分離技術相結合的測定方法。以丫啶酯為發光的標記物，固相載體為極細小的磁性顆粒。其測定原理與放射免疫和聯免中的雙抗體夾心法和競爭結合法相似。 單克隆抗體或抗原包被磁性微粒 抗原抗體結合，洗滌分離 加入氧化劑發光：經過加入氧化劑（H2O2）和 pH 糾正液（NaOH）使成鹼性，這時丫啶酯在不需要催化劑的情況下分解、發光，集光器和光電倍增管接收。記錄5秒鐘內所產生的光子能。 产品： 拜耳ACS:180SE, Advia Centaur, Advia IMS 全 自 動 化 學 發 光 系 統 拜耳 ACS (Automated Chemiluminescence System) 直接化學發光的机理 - ACRIDINE ESTER丫啶酯 最 簡 易 最 快 速 丫啶酯 - ACRIDINE ESTER 不需催化劑 穩定性高 產光強 線性好 本底低 反應快 結合后不影響發光 靈敏度高 - 可達10-15 摩爾 微磁顆粒技術 試 杯 的 最 佳 設 計 - 配 合 微 磁 粒 体 技 術 以 便 最 怏 速 , 最 干 凈 地 分离 結 合 物 与 未 結 合 物 以 便 獲 得 高 靈 敏 度 及 高 重 复 性 降 低 人 抗 鼠 抗 体 (HAMA) 的 干 扰為 大 分 子 的 測 定 提 供 了 高 靈 敏 度 和 高 特 异 性 是 一 种 确 保 高 靈 敏 度 同 時 又 廣 譜 的 設 計 ACS:180 SE 之 特 性 隨 机 存 取 直 接 化 學 發 光 台 型 設 計 180 測 試 /小 時 十 五 分 鐘 內 首 次 結 果 自 動 重 复 功 能 自 動 机 內 稀 釋 凝 塊 識別 兼 容 原 樣 品 試 管 條 碼 識 別 60 個 樣 品 容 量 臨 床 應 用 项目 按 疾 病 分 類 甲 狀 腺 功 能 T