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响应面法优化大豆油中 豆甾醇的微波提取工艺李睿刘欣 1刘彩芬 2李波 1赵红红 1（1.陕西理工学院 化学与环境科学学院；2.陕西理工学院 生物科学与工程学院）［中图分类号］S816.7［文献标识码］ A［文章编号］1002-8358（2014）14-35-4摘 要：以大豆油为原料，经综合比较选取乙酸乙酯为 提取剂，采用微波辅助提取大豆油中的豆甾醇，在单因素实 验的基础上，通过正交试验对提取工艺进行了优化，并进一 步通过响应面分析法，得出更优化的豆甾醇提取工艺。 结果 表明：微波辅助提取大豆油中豆甾醇，微波温度为 50.65 ℃、微波时间为 119.89 s、 微波功率为 400 W、 液料比为 15.56mL/g 条件下，豆甾醇的提取率最高，可达到 36.88%。关键词：豆甾醇；大豆油；微波；响应面分析法；提取植物甾醇广泛存在于各种植物油、坚果和植物种子中， 也存在于其他植物性食物如蔬菜、水果中，其中以小麦胚芽 油、玉米胚芽油、米糠油 、 芝麻油和红花油中的含量较高[1]。 甾醇是甾族化合物中的一种， 在自然界中以游离态或结合 态存在， 分子的基本骨架由三个六元环和一个五元环组成 [2]。 植物甾醇的种类繁多，目前，从植物中鉴定出了 250 多种 植物甾醇。植物甾醇和植物生长激素与能在水中形成分子膜的脂 质结合，生成植 物 激 素 ——— 植 物 甾 醇-核 糖 核 蛋 白 ， 这 种 复 合物具有促进动物性蛋白质合成的功能， 且增加了原植物 激素对环境温度、动物体温和体内分解的稳定性，有利于动 物的生长与健康。 因此可将植物甾醇添加到混合饲料中，提 高禽畜的增长率。 日本利用植物甾醇解决了蚕在人工饲育 中，对混合性饲料的厌食性难题，从而摆脱了养蚕业受桑叶 生产，气候条件等因素的制约。 进一步的开拓应用表明 ，植 物甾醇对鱼、虾、鸟、家禽等的饲养也有显著效益，并可降低 禽、蛋等动物制品的胆甾醇含量[4]。本实验采用微波辅助提取大豆中豆甾醇。 微波提取技基金项目： 陕西理工学院大学生科技爱好者协会创新实验项目，项目编号（UIRP14020）。术作为一种新型提取技术，在提取中草药活性成分中广泛使 用，通过利用微波对植物细胞的破壁和加热作用，加速细胞 内有效成分的快速溶出[5-6]，通过比较得出较优的提取工艺， 旨在为将来的研究提供理论借鉴。1 材料与方法1.1 原料、试剂盒仪器大豆油（汉中市东方油脂有限责任公司）；豆甾醇（西安蓝田生物工程有限责任公司 ，95%）、三氯 甲烷（河南省化工研究所郑州特种化学试剂，分析纯）、乙酸 乙酯（金源化工集团有限公司，分析纯）、乙酸酐（国药集团化 学试剂有限公司，分析纯）、浓硫酸（天津渤海化工集团供销 公司，98%）。WF-2000 微波快速反应系统 （上海屹尧分析仪器有限 公 司 ）； 超 声 波 清 洗 机 （ 宁波新生物科技股份 有限公司 ， 600W）；Cary50 型紫外可见分光光度计 （ 美 国 瓦 里 安 ）； FW117 中草药粉碎机 （天津泰斯特仪器有限公 司 ）；DGG- 9140B 型电热恒温鼓风干燥箱 （上海森信试验仪器有限公 司）；SHZ-D（Ⅲ）循环水式真空泵（巩义予华仪器有限责任公 司）；GR-200 电子天平（日本 AND）等。1.2 提取剂的选择为确定提取豆甾醇的最佳溶剂， 实验对环氧氯丙烷、乙 醇、乙酸乙酯、正丁醇、石油醚和丙酮 6 种常见溶剂进行对比 提取实验。准确称取大豆油 1.00 g 6 份，分别加入乙醇、乙酸乙酯、 环氧氯丙烷、正丁醇、石油醚和丙酮各 16 mL，置于超声波中 超声 40 min 后， 分别取出 1 mL 提取液于 10 mL 具塞试管 中，在真空泵下减压挥干溶剂，分别加入 2 mL 的显色剂，用 三氯甲烷定容至 5 mL，超声 1 min，静 置 10 min 之 后 ， 用 紫 外分光光度计测其吸光度， 并代入标准方程中计算提取率。 实验结果见图 1。图 1 几种不同溶剂对豆甾醇提取率的影响综合上述实验结果，乙酸乙酯和正丁醇的提取率较高。 而正丁醇的沸点为 117.7 ℃， 乙酸乙酯的沸点为 77.1 ℃，考 虑到实验过程中有减压挥发溶剂的过程，乙酸乙酯比正丁醇更加合理。 故本实验采用乙酸乙酯作为提取溶剂。1.3 实验方法1.3.1 标准品的制备称取干燥至恒重的豆甾醇标准品 20.00 mg，用三氯甲烷 溶解，摇匀，乙酸乙酯定容至 20 mL 制得豆甾醇标准溶液。 1.3.2 显色剂的配制将 10 mL 的浓硫酸沿容器壁缓慢加入到 200 mL 的 乙 酸酐溶液中，摇匀，室温冷却备用。1.3.3 标准曲线的制备精密移取豆甾醇标 准 溶 液 0.10、0.20、0.40、0