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杀菌剂生物测定（Bioassay of Fungicides） 一、定义 杀菌剂生物测定是对病原微生物具有生物活性的化合物对敏感的靶标生物或非靶标生物产生各种效应的一种测定技术。 ? 生物测定（bioassay）是由biological和assay组合而成，含义是评价具有生物活性物质对某种生物产生的效应，如干扰或破坏生物体正常生长、发育、代谢、繁殖等。 生物测定的内容: 包括利用敏感靶标生物： ? 活性化合物筛选； ? 田间药效试验； ? 对高等动、植物的毒性与药害测定； ? 有效成分含量； ? 残留的微量分析 利用敏感靶标生物： ? 测定杀菌剂在生物体内的生理生化、 代谢、转化、药理与解毒机理 ? 对非靶标生物自然生态环境影响、残 留动态及对环境污染测定等，这 也属广义的生物测定范畴。 举例： 用敏感的意大利青霉(Penicillum italicum)测定土壤中多菌灵残留量，精确度可达0.2?g/g土壤。 新趋势： 随着近代精密仪器的发展，如极谱、气相色谱、高压液相色谱、远红外、紫外光度计等，仪器分析逐步取代了生物分析。但在尚缺昂贵仪器的情况下，生物测定仍是可采用的简便易行方法。 二、杀菌剂生物测定技术的基本类型 杀菌剂的毒力、毒性和药效等生物测定，依据药剂的性能和研究目的不同有多种测定方法。 按基本测定内容和原理，可归纳为三种类型： 第一类：测定药剂和病原菌的相互作用.又称离体毒力测定。 1 判定药剂的毒力主要是依据病菌与药剂接触后的反应。 如药剂对病原菌的孢子萌芽、生长、繁殖或其他生命活动过程的抑制作用。 菌种要求：测定体系中所用的菌种，一般是在培养基上能够培养、遗传上一致的标准菌种 。 2. 优点：室内离体毒力测定不受季节和自然条件限制，在较小空间里可以进行大规模的药剂生物测定研究，短期内可获得试验结果，各种条件便于人为控制，结果稳定，利于毒力比较。 3. 应用： ? 新药剂筛选 ? 毒理； ? 抗药性； ? 残留及药剂质量检验； ? 加工剂型和结构； ? 理化性能与毒力的关系； ? 混剂的联合作用等可在室内研究的生 物测定内容。 第二种类型：测定“药剂、病菌和寄主”三者之间的相互作用，以寄主发病的程度来衡量药剂效力； ? 适用范围：在室内、温室和大田进行； ? 优点：除可测定药剂防治某种植物病害的效果外，还可研究药剂的防治原理、使用技术、渗透和内吸性能、残效及其对非靶标生物的影响等；与实际应用较接近，测定结果实用价值高。 ? 缺点：在这种测定体系中，因包含寄主，操作比较复杂，测定周期较长，尤其在大田测定药效常受季节限制和多种自然条件和栽培因子的影响，结果不稳定。 在农药筛选、防治原理和抗药性等研究的初期，也常 使用一致的作物部分组织、器官进行室内测定。 优点：这样不但能够准确获得那些可能只在活体寄主上才表现生物活性的化合物的毒力，而且还能达到节省空间、时间、人力、物力、财力、快速、简便和结果准确稳定的目的。 现状：杀菌剂前期的毒力和药效测定，往往涉及的药剂和病菌种类多，数量大，需要在短期内筛选出有希望的药剂进一步测定药效。所以，一般首先进行室内的简便快速测定，然后进行温室盆栽植株测定，最后进行不同生态环境条件下的大田药效试验，判定“病菌、药剂、寄主环境条件”相互作用情况下，药剂的实用价值。 第三种类型：对非靶标生物的毒性和药害测定 ，即药剂对高等动、植物及环境生态的不良影响 。 ? 一种新杀菌剂需要测定其对高等动物，如大、 小鼠的口服、经皮、吸入和对家兔眼、皮肤 刺激，对豚鼠致敏等急性毒性； ? 对鼠、狗吸入、经皮及在动物体内的蓄积等亚 慢（急）性毒性； ? 对动物的致突变、致畸、致癌、迟发性神经毒 性、对繁殖的影响等慢性毒性。 ? 测定药剂对环境生态的影响内容，主要 包括药剂对鱼类及其他水生生物、蚕、 蜜蜂、鸟类、天敌、蚯蚓和土壤微生 物等的毒性。 ? 安全系数：杀菌剂在实际应用前，还需 测定其对作物的安全系数，即引起不 同种作物或作物不同生育期药害的最 低浓度与推荐使用浓度之比。 ?三、杀菌剂毒力测定 ?多采用室内离体测定技术，对病菌或培养基质施以药剂，以孢子萌发率、菌体生长速率、菌体形态或呼吸作用等生理变化作为杀菌剂毒力衡量指标。