细菌性腹泻三联口服疫苗的研制及其免疫效果的初步评价.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１７，３７（７）：１８２６ ＤＯＩ：１０．１３５２３／ｊ．ｃｂ 细菌性腹泻三联口服疫苗的研制及其 免疫效果的初步评价 １ １ ２ ２ １ 刘　地 　晏　婷 　何秀娟 　郑文云 　马兴元 （１华东理工大学生物工程学院生物反应器工程国家重点实验室　上海　２００２３７） （２华东理工大学药学院　上海市新药设计重点实验室　上海　２００２３７） 摘要　由细菌引起的感染性腹泻，至今仍是世界范围广泛流行的传染病之一。由于耐抗生素病 原菌的不断涌现，导致了抗生素药物的治疗效果不佳。因此，研发便捷、有效的疫苗对于细菌性 腹泻的预防与治疗尤为重要。针对产肠毒素大肠杆菌、霍乱弧菌与志贺氏痢疾菌这三种最为主 要的细菌性腹泻病原菌，设计和筛选了以热不稳定肠毒素亚基蛋白为抗原和黏膜佐剂、霍乱弧菌 鞭毛蛋白及志贺毒素亚基蛋白为抗原的三联疫苗。通过工程大肠杆菌获得了相应的抗原与佐剂 蛋白，并以海藻酸钙壳聚糖微球为疫苗的口服载体，制备了疫苗的口服制剂。体外实验表明，微 球载体中的蛋白质在模拟胃液中释放较低，但在模拟肠液中释放迅速，这种载体能够实现疫苗在 肠道内定向释放的目的。通过对灌胃免疫后小鼠免疫指标的检测，证明了疫苗能够刺激机体产 生抗原特异性的ｓＩｇＡ与ＩｇＧ抗体，免疫组与对照组相比，差异显著（Ｐ＜０．０５），并提升了外周血中 ＋ ＋ ＋ ＣＤ４Ｔ细胞的含量（７．５％～９．５％）与ＣＤ４Ｔ／ＣＤ８Ｔ细胞的比率，有效地激活了机体的黏膜免 疫与系统免疫，能够对机体起到保护作用。 关键词　细菌性腹泻　黏膜免疫　三联口服疫苗 中图分类号　Ｑ８１５ ［６］ 　　由病原微生物引起的感染性腹泻，至今仍是世界 人的死亡 ；志贺氏痢疾菌也是引起肠道感染的重要 范围广泛流行的传染病之一。根据世界卫生组织的数 原因，每年造成了约１．６亿人次的感染（６０％是５岁以 据统计，全球每年发生５亿～１０亿次感染性腹泻，并导 ［７］ 下儿童）和超过１０万人的死亡 。 ［１］ 致了２００万～３００万人的死亡 。其中发病率和死亡 　　对于由微生物引起的急性与慢性腹泻，国内外主 率最高的是５岁以下儿童，每年约有８０万儿童因腹泻 要采取抗生素药物治疗的方法，特别是在一些发展中 ［２］ 类疾病死亡 。另外，旅行者腹泻也是在发展中国家 国家，一些广谱性的抗生素（如环丙沙星、匹美西林、阿 ［３］ ［８］ 最为常见的健康问题 。 奇霉素、头孢三嗪等）常被使用 。由于抗生素在疾病 　　大约８０％的腹泻病都是由细菌感染引起的，其中， 预防和治疗、动物养殖业、农产品种植业等领域中的广 产肠毒素大肠杆菌、霍乱弧菌和志贺氏痢疾菌是三种 泛的使用，导致了耐抗生素微生物显著增加，特别是多 ［４］ ［９］ 最为主要的病原菌 。在三种病原体中，产肠毒素大 种肠道革兰阴性致病菌 。许多对抗生素敏感的菌 肠杆菌引发的感染数量最多，每年引起了约２亿次的 株，通过变异产生了多重耐药性，导致药物治疗效果不