第四节 四环素类抗生素的分析.ppt

第四节 四环素类抗生素的分析 the analysis of tetracycline antibiotics 一、简介 二、化学结构与性质 三、鉴别试验 四、特殊杂质检查 五、含量测定 一、简介 四环素类抗生素是由放线菌产生的一类广谱抗生素，包括金霉素、土霉素、四环素及半合成衍生物甲烯土霉素、强力霉素、二甲胺基四环素等，其结构均含并四苯基本骨架。广泛用于多种细菌及立克次氏体、衣原体、支原体等所致之感染。 这类抗生素分子有四个环构成，故统称为四环素类抗生素。 二、化学结构与性质 (一)、化学结构： 1、四环素类抗生素，可以看作四并苯或萘并萘的衍生物，基本结构如下： 1、母核：本类药物为四并苯或萘并萘的衍生物 ，有A、B、C、D四个环 ，两个含酮基和烯醇烃基的共轭体系 2、取代基：酚羟基、烯醇基、酮基、二甲氨基、酰胺基 常用四环素类抗生素 (二)、性质：  1、酸碱性与溶解度 2、旋光性 3、紫外吸收和荧光性质 4、稳定性 1、酸碱性与溶解度 本类抗生素的母核上C4位上的二甲氨基[-N(CH3)2]显弱碱性;C10位上的酚羟基(-OH)和两个含有酮基和烯醇基的共轭双键系统(式中虚线内所示部分)显弱酸性,故四环素类抗生素是两性化合物.遇酸及碱,均能生成相应的盐,临床上多应用盐酸盐。 这类抗生素是结晶性物质，具引湿性。其盐酸盐易溶于水，并溶于碱或酸性溶液中，而不溶于三氯甲烷、乙醚等有机溶剂。 2、旋光性 四环素类抗生素分子中具有不对称碳原子，因此有旋光性，可用于定性、定量分析。 4、稳定性 四环素类抗生素对各种氧化剂（包括空气中氧在内）、酸、碱都是不稳定的。干燥的四环素类游离碱和他们的盐类避光条件下保存均较稳定，但其水溶液随PH的不同会发生差向异构化、降解等反应，尤其是碱性水溶液特别容易氧化，颜色很快变深，形成色素。 (1)差向异构化性质：四环素类抗生素在弱酸性(Ph2.0~6.0)溶液中会发生差向异构化。这个反应是由于A环上手性碳原子C4构型的改变，发生差向异构化，形成差向四环素类，而失去抗菌能力。  （2）降解性质 ?酸性降解：在酸性条件下（pH2），特别是在加热情况下，四环素类抗生素C6上的醇羟基和C5a上的氢发生反式消去反应生成脱水四环素（ATC）：  ?碱性降解：在碱性溶液中，由于氢氧离子的作用，C6上的羟基形成氧负离子，向C11发生分子内亲核进攻，经电子转移，C环破裂，生成无活性的具有内酯结构的异构体： 三、鉴别试验 1、高效液相色谱法《中国药典》和USP（29）采用高效液相色谱法鉴别盐酸土霉素、盐酸四环素、盐酸金霉素等。 2、薄层色谱法 《中国药典》、BP（2005）都采用本法鉴别四环素类抗生素。 采用硅藻土作载体，为了获得较好的分离，在粘合剂中加有甘油以及中性的EDTA缓冲液。EDTA可以克服因痕量金属离子存在而引起的斑点拖尾现象。 3、IR光谱法 《中国药典》收载的四环素类抗生素中，除土霉素外均采用了红外光谱法鉴别。 4、UV光谱法 本类药物的紫外鉴别法多以酸性甲醇溶液为溶剂，《中国药典》规定最大吸收波长和指定浓度下的吸光度；USP采用标准对照品法计算样品的效价。 5、显色法 四环素类抗生素遇硫酸立即产生颜色，不同的四环素类抗生素具有不同的颜色，有的有颜色变化，据此可区别各种四环素类抗生素。 本类抗生素分子结构中具有酚羟基，遇三氯化铁试液即呈色。 四、特殊杂质检查 （一）有关物质 四环素类抗生素中的有关物质主要是指在生产和贮存过程中易形成的异构杂质、降解杂质（ETC、ATC、EATC）等。Ch.P(2005)、USP(29)和BP（2005）均采用HPLC法控制四环素类抗生素中的有关物质。 (二)杂质吸收度 四环类抗生素多为黄色结晶性粉末；而异构体、降解产物颜色较深，此类杂质的存在均可使四环素类抗生素的外观色泽变深。因此中国药典和BP（2000）均规定了一定溶剂、一定浓度、一定波长下杂质吸收度的限量。 （三）残留有机溶剂 一些四环素类药物需要控制残留有机溶剂，如Ch.P和BP规定盐酸多西环素检查乙醇，限量均为4.3%~6.0%。 五、含量测定 四环素类抗生素的含量测定，目前各国药典多采用高效液相色谱法。 色谱条件： 固定相：十八烷基硅烷键合硅胶 流动相：0.1mol、L草酸铵溶液-二甲基甲酰胺-0.2mol/L磷酸氢二铵溶液（68：27：5） 组分流出顺序：4-差向四环素、差