鸡原代肝细胞培养及叶酸对脂质代谢相关基因表达的影响-中国农业科学.pdfVIP

中国农业科学 2017,50(21):4205-4211 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2017.21.015 鸡原代肝细胞培养及叶酸对脂质代谢相关基因表达的影响 刘艳利，党燕娜，段玉兰，杨小军 （西北农林科技大学动物科技学院，陕西杨凌 712100 ） 摘要：【目的】腹脂沉积是目前家禽养殖过程中的一个普遍现象。与哺乳动物不同，家禽的脂质代谢主要发 生在肝脏，前人很多研究发现叶酸和IGF2 均参与调控动物的脂质代谢，因此，试验旨在建立鸡原代肝细胞培养条 件，并研究叶酸对鸡原代肝细胞脂质代谢相关基因表达的影响，为体外探究叶酸调控家禽脂质代谢机制提供依据。 【方法】采用胶原酶消化配合鸡淋巴细胞分离液纯化法分离得到鸡原代肝细胞，用高碘酸希夫氏染色方法进行肝 细胞鉴定；同时分离得到的肝细胞用正常培养基培养36 h后，更换含不同叶酸浓度的培养基（0，1，5，10，15， 和 20 mg·L-1 ），每个叶酸浓度 6 个重复，处理 12 h 后收集上清液，并收集细胞提取总 RNA，用 RT-qPCR 法检测基 因相对表达量，MTT 法检测细胞增殖，商业试剂盒方法检测上清液中 LDH 含量。并分析基因表达之间的相关性以 及叶酸剂量与基因表达之间的回归关系。【结果】采用胶原酶消化配合鸡淋巴细胞分离液纯化法可以获得分离效果 好且纯度高的鸡肝细胞；不同剂量的叶酸没有影响肝细胞培养液中的 LDH 活性（P ＞0.05），也没有对肝细胞的增 殖产生影响（ -1 -1 P ＞0.05）；与1 mg·L 剂量的叶酸对照组相比，10、15和20 mg·L 的叶酸显著降低了肝细胞IGF2以 及与脂质合成代谢有关的 ACC 和 FAS 基因的表达（P ＜0.05），但叶酸并没有对鸡肝细胞中与脂质分解代谢有关的 CPT1 和 PPARα基因的表达产生影响（P ＞0.05）；并且鸡肝细胞中 ACC 和 FAS 基因的表达与 IGF2 存在一定的正相 关（P ＜0.05）；除此之外，鸡肝细胞IGF2，FAS和ACC的表达与叶酸剂量也存在着线性和二次曲线的回归关系（P ＜0.05）。【结论】叶酸的添加可降低鸡原代肝细胞中与脂肪酸合成相关基因的表达，并且 FAS 和 ACC 基因的表达 可能与IGF2具有正相关关系；本试验中叶酸的最适剂量为15 mg·L-1 。 关键词：叶酸；IGF2；肝细胞；脂质代谢；鸡 Effect of Folic Acid on Lipid Metabolism Associated Gene Expression in Primarily Cultured Chickens Hepatocytes LIU YanLi, DANG YanNa, DUAN YuLan, YANG XiaoJun (College of Animal Science and Technology, Northwest AF University, Yangling 712100, Shaanxi) Abstract: 【Objective 】Abdominal fat deposition is a universal phenomenon at present in poultry industry. Different from mammals, 90%-95% of lipid metabolism in poultry occurs in the liver. Previous studies have demonstrated folic acid and IGF2 were involved in animals lipid metabolism. The study was condu