芸香苷水解液中糖纸色谱检测条件优化.docVIP

芸香苷水解液中糖纸色谱检测条件优化 　　[摘要] 槐米中芸香苷的提取、精制及对其水解液中糖的纸色谱鉴别是我校中药制药技术及药品质量检测技术等专业的学生必做的化学实验。但多年来，采用径向纸层析方法，以传统的BAW上层展开系统即正丁醇-醋酸-水（4∶1∶5，上层）进行展开，易出现鼠李糖条带严重扩散等问题，效果不理想。本文对纸色谱展开条件进行了改进，确定乙酸乙酯-吡啶-水（10∶4∶0.5）为最佳展开剂，葡萄糖及鼠李糖条带清晰，显色明显，分离度良好，方法简单，重现性良好，可用此法快速鉴别葡萄糖和鼠李糖。 [关键词] 芸香苷；葡萄糖；鼠李糖；径向纸层析 [中图分类号] R284.1 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2014）02-98-02 芸香苷，又名芦丁，属黄酮类化合物，为中药槐米的主要有效成分，有凉血止血，清肝泻火，保护和恢复毛细血管弹性，减小毛细血管渗透性等功能。芸香苷是由槲皮素的3位与一分子的芸香糖即rhaα1→6glc连接而成，槐米中芸香苷的含量不得少于15.0%[1]。 纸色谱法是分离、鉴定有机化合物的重要方法之一，按操作方法可分为垂直型和水平型两种[2]。垂直型包括上行法和下行法，即将滤纸条垂直放置，使展开剂借助毛细管效应或重力作用向上或向下移动[3]；水平型即为径向纸色谱法，也称之为圆形纸色谱法，即将圆形滤纸水平放置，使展开剂由中心向四周扩散[4]。多年来，我校采用碱溶酸沉法从槐树的花蕾中提取芸香苷并精制后水解，水解液中糖的鉴定均采用径向纸层析方法。但在中药化学及天然药物化学的实验课上，中药制药、药物制剂等专业的多名同学采用传统的BAW系统上层溶液即正丁醇-醋酸-水（4∶1∶5，上层）[5]进行展开，出现了较多的问题，实验效果不理想，主要表现为：鼠李糖环带出现严重扩散。此类问题的出现并不完全是由学生的实验操作水平引起的，另展开系统中的采用的正丁醇具有特殊气味，令人难以接受，且刺激呼吸系统和皮肤，具一定毒性。为此，笔者对葡萄糖和鼠李糖的纸层析展开条件进行了改进，较大程度的解决了上述问题。 1 实验部分 1.1 仪器与试药 WS70-1型红外线快速干燥箱，培养皿（Φ16cm）两个，毛细玻璃管（Φ0.5mm）；槐米购自沈阳市药材公司，使用前粉碎成粗粉，过20目筛；葡萄糖（中国药品生物制品鉴定所）；鼠李糖（中国药品生物制品鉴定所）；定性滤纸（Φ18cm）；吡啶（天津市科密欧化学试剂开发中心，分析纯）；乙酸乙酯（天津市百世化工有限公司）；其他药品均为国产分析纯药品，所用水为一次蒸馏水。 1.2 实验方法与结果 1.2.1 对照品溶液及供试品溶液的制备 对照品溶液的制备：取无水葡萄糖对照品适量，精密称定，加蒸馏水制成每1mL含0.1mg的溶液，即得；取鼠李糖对照品适量，精密称定，加蒸馏水制成每1mL含0.1mg的溶液，即得。 1.2.2 供试品溶液的制备 取精制后的芸香苷0.5g，置于250mL的圆底烧瓶中，加2%H2SO4 50mL，回流40min，放冷抽滤。取滤液10mL，逐步加Ba（OH）2细粉（大约1～1.5g）中和至中性，过滤至坩埚中，浓缩至1mL左右，作为供试品溶液[6]。浓缩过程中注意避免炭化。 2 方法与结果 2.1 实验方法 本实验采用径向纸色谱法进行展开。取一张圆形色谱滤纸，在滤纸圆心处打一小孔。把滤纸从圆心处平均分成六等份，在距圆心处0.5cm处画一圆圈，作为基线。吸取葡萄糖和鼠李糖对照品溶液及供试品溶液进行点样。点样时毛细管以用铅笔标记的距圆心处的小圆为基线，即环式点样，且相同的样品应以对角的两个位置点样。取长10cm，宽1cm的滤纸条卷成筒状，塞入滤纸圆心处的小孔当中。取两个相同大小的培养皿，并在其中一个的中心处放置一装有乙酸乙酯-吡啶-水（10∶4∶0.5）的小瓶盖。取点样后并塞入滤纸芯的圆形滤纸，把滤纸芯放入瓶盖中，使其接触展开剂，迅速盖好另一个培养皿，展开。约半小时后取出，晾干，喷以苯胺-邻苯二甲酸试剂，喷雾后于105℃烘10min或在红外灯下加热10～15min。 2.2 实验结果 供试品色谱中，在于对照品相同的位置，显现相同颜色的环带，如图1示。实验结果表明，芸香苷水解液中含葡萄糖和鼠李糖，即是芸香苷为苷元与葡萄糖和鼠李糖连接而成。葡萄糖与鼠李糖条带清晰，无拖尾，二者的Rf值分别为0.516和0.645，分离度良好。 3 讨论 历年来我校采用径向纸层析鉴别芸香苷水解液中的葡萄糖和鼠李糖，多以传统的BAW系统的上层溶液展开，多出现鼠李糖条带严重扩散等问题，且正丁醇具特殊气味，并具一定毒性，另展开过程耗时长，葡萄糖和鼠李糖达到良好分离约需1h左右，综合以上因素，对葡萄糖和鼠李