荧光光谱法探究药物和血清白蛋白相互作用概述.docVIP

荧光光谱法探究药物和血清白蛋白相互作用概述 　　摘要：运用荧光光谱法探究药物与血清白蛋白相互作用已成为药物基础研究的重要内容，本文就荧光光谱法的研究方法和内容作一综述，并讨论了本研究的发展方向。 关键词：药物 血清白蛋白 荧光光谱 中图分类号：R96 文献标识码：A 文章编号：1672-5336（2013）14-0054-02 药物大多通过与生物体内大分子的相互作用而展现生物活性。血清白蛋白作为血浆中最重要的蛋白质，担负着储存和运输药物及其它内源性和外源性小分子的任务，因此常作为靶点与药物结合。荧光光谱法因其自身强选择性、高灵敏度的优点，现已成为研究药物与生物大分子相互作用的重要手段[1]。本文主要对药物与血清白蛋白相互作用的荧光光谱研究方法、作用机制、结合特征等方面进行综述。 1 荧光光谱研究方法[2，3] 1.1 荧光猝灭法 荧光猝灭是指荧光体（如蛋白质分子）与溶质分子（如相关药物小分子）结合作用，引起荧光体荧光强度降低或不发生荧光的现象。通过对研究猝灭过程的光谱研究，可得到药物与蛋白质相互作用的相关参数信息。色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸是血清白蛋白分子中含有能够发射荧光的氨基酸残基，其中，色氨酸荧光在蛋白质固有荧光中占有重要地位，选择295nm为激发波长时，则基本只发射色氨酸荧光。因此，色氨酸的荧光变化对蛋白质的构象变化及药物分子的作用对其构象的影响都能提供相应的参考。 1.2 同步荧光光谱法 同步荧光谱法是在荧光物质的激发光谱和荧光光谱中选一适宜的波长差值Δλ，用发射和激发两个波长进行扫描，由测得的相关数据，通过软件绘制成同步荧光光谱图。同步荧光与激发和发射光谱都有关，根据被测物质的吸收和发射性能改善选择性。同步荧光光谱法分为固定波长同步扫描荧光光谱法、固定能量同步扫描荧光光谱及可变波长的同步荧光光谱，在研究药物与血清白蛋白的相互作用时应用最多的是固定波长同步扫描荧光光谱法。固定波长同步扫描荧光光谱法是在扫描过程中使激发和发射波长间保持固定的差值，通常情况下选择等于斯托克斯位移的Δλ。当固定Δλ=60nm和Δλ=15nm时的同步荧光光谱为色氨酸残基和酪氨酸残基的特征荧光光谱。溶液环境对蛋白质空间构象有很大影响，故蛋白质构象变化依据绘制的同步荧光光谱图的改变来判断分析。 2 荧光光谱研究内容[4，5] 2.1 研究荧光猝灭机制 荧光猝灭的原因通常是由于荧光物质与猝灭剂作用引起荧光物质的荧光强度降低、荧光量子效率降低或激发态寿命缩短。一般情况下，药物加入蛋白质溶液中使蛋白质固有的荧光下降的猝灭机制主要有静态猝灭和动态猝灭和非能量辐射。静态猝灭是由药物与蛋白质基态分子生成不发荧光光的配合物或分子复合物。动态猝灭与温度有关，是药物与蛋白质基态相互作用的结果。动态猝灭作用过程符合Stern-Volmer方程： F0/F=1+KQτ0[Q]=1+Ks[Q] F0，F分别是蛋白质与药物作用前后Q的荧光强度，KQ为双分子猝灭过程速率常数，τ0为生物大分子的平均寿命，一般约为1×10-8s，[Q]为猝灭剂Q的浓度，Ks为Stern-Volmer常数，以此方程作图，可以得到一条截距为1、斜率为Ks的直线。 文献表明，静态猝灭与动态猝灭的判断依据如下： （1）依据猝灭常数相关变化。 对于动态淬灭，温度升高增大动态淬灭的荧光猝灭效率，增大猝灭常数。而静态淬灭常形成分子复合物，温度升高可能导致复合物的稳定性下降，从而荧光强度下降。另据研究发现，各类猝灭剂对生物大分子的最大扩散碰撞猝灭常数为2.0×1010Lmol-1?s-1，倘若求得的KQ大于此常数，则可判定为静态猝灭，此为科研实验中最常用的判断标准。 （2）测定荧光分子的荧光寿命。 当发生动态猝灭时，猝灭剂使荧光分子寿命缩短，τ0=F0/F；当发生静态猝灭时，猝灭剂并不改变荧光分子激发态的寿命，τ0=1。测定荧光分子的荧光寿命是区分动态猝灭和静态猝灭最确切的手段。 2.2 确定结合常数与结合位点数 结合常数和结合位点数可以通过双对数公式求出，当荧光分子与猝灭剂相互结合作用时，其结合位点数n和结合常数Ka可由下式求出。 Lg[（F0-F）/F]=nLg[Q]+LgKa 做Lg[（F0-F）/F]对Lg[Q]的图，根据斜率和截距求得结合位点数n和结合常数Ka。 2.3 确定作用力常见类型 药物与血清白蛋白质间的作用力，通常包括氢键（HydrogenBond）、范德华力（Vander walls force）、静电引力（Electrostatic interactions）和疏水力（Hydrophobic interactions）。药物不同，与蛋白质的作用力