第4章23 免疫检测与防治.ppt

2.疫苗 ⑴灭活疫苗（死疫苗）与减毒活疫苗 活疫苗：人工的方法使病原体减毒或从自然界 筛选病原体无毒株或微毒株所制成的活的微生 物制剂。也称减毒活疫苗，卡介苗，甲肝疫苗。 死疫苗：选用免疫原性强的病原微生物，经人工大量培养，经理化方法将其杀死后制成的疫苗。 无毒力，但仍保持其免疫原性。伤寒、百日咳、 钩端螺旋体、斑疹伤寒、乙型脑炎等疫苗 死疫苗与活疫苗特点的比较 含义：细菌外毒素经0.3～0.4%甲醛处理。 ⑵类毒素 特点：失去毒性而仍保留其免疫原性。 ⑶新型疫苗 亚单位疫苗、合成肽疫苗、基因工程疫苗。 食用转基因植物以预防接种已初步成功。 含义：细菌外毒素经0.3～0.4%甲醛处理。 ⑵类毒素 特点：失去毒性而仍保留其免疫原性。 （二）人工被动免疫 1.定义：给人体注射含特异性抗体的 免疫血清或细胞因子等制剂，以治疗 或紧急预防感染的措施。 Company Logo 免疫学检测技术 的基本原理 免疫学检测方法： 依据免疫学理论设计的测定 抗原、抗体、免疫细胞及细胞因子 的实验方法。 一、基本原理 抗原与相应抗体特异性结合，并呈现某种反应现象，如凝集或沉淀，以此检测抗原或抗体。 第一节 体外抗原抗体结合反应 的特点及其影响因素 ㈠抗原抗体反应的特点 1.抗原抗体结合的特异性 抗原抗体结合除空间构型互补外，还以氢键、 静电引力、范德华力和疏水键等非共价方式 结合，一定条件下复合物可解离成游离状态， 且仍保持原有性质。 2.抗原抗体结合的可逆性 复合物解离度主要取决于特异性抗体超变区 与相应抗原表位三维空间构型的互补程度， 互补程度越高，分子间距越小，作用力越大， 两者结合越牢固，不易解离；反之，则容易 发生解离。 3.抗原抗体结合的比例与浓度 抗原与抗体结合比例合适，则可形成 肉眼可见的大结合物；反之形成肉眼 不可见的小结合物。 4.抗原抗体反应的阶段性 第二阶段：可见反应阶段。 数分钟、数小时至数日，因素影响多。 第一阶段：特异结合阶段。 仅几秒到几分钟、尚无可见反应； ㈡抗原抗体反应的主要影响因素 1.抗原和抗体浓度、比例 2.电解质 3.温度 4.酸碱度 二、血清学反应的种类 1.凝集反应 细菌、细胞等颗粒性抗原与相应的抗体， 或表面包被抗原的颗粒状物质与相应的 抗体在电解质存在的条件下结合，出现 肉眼可见的凝集团现象。 2.沉淀反应 毒素、组织浸液以及血清中的蛋白等 可溶性抗原与相应抗体反应后，出现 肉眼可见的沉淀物。 3.免疫标记技术 用酶、荧光素、同位素等物质标记 抗体或抗原进行抗原抗体反应，检 测抗原或抗体的技术。 如免疫酶技术、免疫荧光技术、 放射免疫测定。 第一抗体 抗原 第一抗体—抗原 第二抗体 生物酶 第一抗体—抗原-第二抗体 显色 第二节 免疫细胞的测定 淋巴细胞是机体内主要的免疫细胞，检测其数量和功能是了解机体免疫状态的重要手段。 一 、淋巴细胞的分离 常用ficoll（淋巴细胞分离液）密度梯度离心除去红细胞、粒细胞而获得外周血单个核细胞（PBMC），再经吸附除去单核细胞而得到淋巴细胞。若要分离T细胞，可用尼龙毛柱、抗CD3单抗、E花结试验等分离。 二、免疫细胞细胞的鉴定 根据细胞的某些标志，采用免疫荧光法、磁珠分离法、流式细胞术等方法可确定细胞不同类型和比例。 （一）T细胞功能测定 1. T细胞增殖试验 植物血凝素（PHA）、刀豆蛋白A（ConA）等丝裂原及抗CD3单抗等能非特异性激活培养的T细胞，使其转化成淋巴母细胞的试验。 淋巴细胞功能测定 在该增殖过程中，细胞DNA、RNA、蛋白质的合成增加，细胞形态改变。也可检测特异性抗原致敏的T细胞。 （1）氚标记的胸腺嘧啶核苷掺入法：该法灵敏、可靠，应用广泛，但需特殊仪器（液体闪烁仪），易有放射性污染。 （2）MTT法：该法操作简单，无放射性污染，但敏感性相对较差。 淋巴细胞功能测定 2. 细胞毒试验： Tc、NK细胞对靶细胞有直接杀伤作用，可根据待检效应细胞的性质，选用相应的靶细胞。 （1）51Cr释放法：用51Cr标记靶细胞，γ记数仪测定释放的51C活性。 （2）MTT法：其原理与增殖试验相同，但甲 生成量与靶细胞溶解破坏水平呈负相关。 （3）乳酸脱氢酶释放法：细胞受损致膜通透性改变，乳酸脱氢酶释放到培养液中。 3.细胞因子检测： CK的检测有助于了解其在免疫调节中的作用，鉴定分离的淋巴细胞，监测某些疾病状态的细胞免疫功能。常用的检测方法有以下三种： （1）ELISA