不同诱导条件下的VBNC状态副溶血弧菌的PMA-qPCR定量-食品科学.PDFVIP

※安全检测 食品科学 2017, Vol.38, No.20 215 不同诱导条件下的VBNC状态副溶血弧菌的 PMA-qPCR定量检测及其呼吸活性分析 刘羽霏，方 祥，廖振林，王 丽，钟青萍* （华南农业大学食品学院，广东省食品质量与安全重点实验室，广东广州 510642 ） 摘  要：定量检测不同诱导条件下的活的非可培养（viable but non-culturable ，VBNC ）状态副溶血弧菌的变化情 况，并对VBNC菌的呼吸活性进行分析。采用叠氮溴化丙锭（propidium monoazide ，PMA ）与荧光定量聚合酶链 式反应（fluorescence quantitative polymerase chain reaction ，qPCR ）结合的技术（PMA-qPCR ）定量检测副溶血弧 CTC 5-cyano-2,3-ditolyl tetrazolium chloride 菌活菌数。结合激光扫描共聚焦显微镜和流式细胞仪优化传统 （ ）呼吸 检测法对VBNC状态的副溶血弧菌进行分析。结果表明PMA-qPCR检测技术结合平板计数的方法，可用于定量检测 副溶血弧菌诱导过程中活菌数和可培养菌数的变化情况，并利用差值测定出VBNC细胞的浓度。在不同的温度、 NaCl 7 60 d VBNC VBNC 含量和氯霉素含量的诱导条件下，副溶血弧菌在其中的 种条件下在 内进入了 状态。 细胞终 2 5 5.75 10 CFU/mL 1.70 10 CFU/mL CTC 4 ,6- -2- ’ 浓度最低为 × ，最高为 × 。在细胞呼吸实验中，采用 与 二脒基 苯基吲哚 4 ,6-diamidino-2-phenylindole DAPI VBNC （’ ， ）双染法能在激光扫描共聚焦显微镜下清晰地观察到 细胞表面的红色 荧光，有效区分死活细胞。同时利用流式细胞仪能够根据荧光强度快速区分呼吸活性呈阴性和阳性的细胞。本研究 为VBNC细菌的检测和生理特性的研究提供了新的思路和依据。 VBNC PMA-qPCR 关键词：副溶血弧菌；活的非可培养（ ）状态； ；流式细胞仪；激光扫描共聚焦显微镜 Vibrio parahaemolyticu