人白细胞介素2受体il－2rcdna在.pdfVIP

遗传学报，18(4);292-2992,1991 Acta Cenetica Sinica 人白细胞介素2受体 I（L-2R)cDNA在 哺乳类细胞中表达的初步研究” 邹全明2)蔡武城 沈伟华3）朱锡华2）李昌本 赵寿元 复（且大学遗传学研究所，上海 200433) 按 DNA-磷酸钙共沉淀法将人白细胞介素2受体＿(IL-2R)cDNA转染小鼠成纤维细胞 L9295经RNA点溃杂交分析、荧光标记 IL-2染色和抗Tac人（IL-2受体 “链夕特异性玫瑰 花环试验，均证明转入的 IL-2RcDNA在 L929细胞中表达，其产物具有结合 IL-2和抗 Tac抗体的能力。本文还报道了T细胞白血病 Jukat细胞和 Molt-4等细胞系异常表达 IL-2R的结果，并对此作了分析和讨论。 关键词 人白细胞介素2受体 (IL-2R)cDNA，转染，小鼠L9”细胞 T细胞在人体免疫反应中起着重要的调节和效应作用，T细胞一旦被抗原或有丝分 裂原激活后，便迅速产生白细胞介素2(IL-2）和白细胞介素2受体 I（L-2R)；只有当 IL-2与 IL-2R结合后才能传递T细胞增殖信号乡进一步介导辅助性细胞、特异效应细胞 及细胞毒T细胞的功能。IL-2R的产生是．T细胞接受内源或外源 IL-2作用的关键，决 定T细胞免疫应答的强度和持续时间m。此外，被人类嗜T细胞白血病病毒I型和II型 (HTLV-I和 HTLV-II)感染的白血病性T细胞，都异常地过量生成 IL--2Ru$o因此， 研究 IL-2R基因的分子结构、功能和表达，将有助于阐明正常的免疫应答机制和逆转录 病毒感染所致成年T细胞白血病 A（TL）的发病机理。 国外已克隆了人IL-2RcDNA9(101，且在真核细胞中表达(3r1气它的部分序列也已在大 肠杆菌中获得表达(13［1。我们将人 fL-2RcDNA(TaccDNA，即人IL-2受体 “链cDNA) 转染小鼠成纤维细胞株 L929，通过测定转录产生的mRNA、蛋白质产物一为生物活性和抗 原性，都证明转人的人 IL-2RcDNA在异种细胞中表达 。本文还报道了4株恶性化淋巴 细胞系异常表达 IL-2R的结果，并就可能包含的免疫、病理学意义作了讨论。 材 料 和 方 法 一（）p91-IL2R质粒的构造 琼脂糖凝胶电泳分离 EcoRI酶切的人 IL-2RcDNA片段 美（国V,-海川博士惠赠）， iDH5.1感受态菌。一经细胞破 亚克隆在质粒 p91023的EcRI位点上，转化 E.col 碎凝胶 c（rackinggel）电泳初步鉴定转化子。 IL-2R cDNA 在载体上插人的方向用 本文于 1989年7月3日收到a 1)工作中得到吕群、喻红和郑力新等同志的热情一帮助，谨此致谢。 2）现在中国人民解放军第三军医大学免疫教研室。 3)现在苏州医学院生化教研室。 4期 邹全明等：人白细胞介素2受体 I（L-2R)cDNA在哺乳类细胞中表达的初步研究 293 BamHI酶切鉴定，按TCA 三（抓醋酸）法大量抽提质粒DNAu41，供转染细胞用。 质粒p91023是一种穿梭质粒，可以在大肠杆菌和哺乳动物中复制0【1。它带有质拉 pBR322的复制起始点和四环素抗性基因，便于在大肠杆菌中复制扩增；另外它还带有与 真核基因表达有关的一些成分。这些成分是：(1)SV40的复制起始点和增强子；(2)腺 病毒主要晚期启动子；(3）一个杂合的内含子；(4)SV40早期多聚腺昔酸信号；分（腺病毒 VA基因；(6）小鼠双氢叶酸还原酶 (DHFR）的编码顺序。这些成分能增加外源DNA 转录、转译产物的稳定性。外源 DNA利用该质粒上单一的EcoRI位点而插在DHFR 编码顺序的前面 见（图I,A)o Tripartiteleader lntron p91023(B)