木瓜蛋白酶无载体固定化研究.pdfVIP

研究报告 中 国 酿 造 2011年第7期 总第232期 ·105· 木瓜蛋白酶无载体固定化研究 张凤杰，杨 洁，李利锋，李 薇，朱启忠 (山东大学威海分校海洋学院，山东 威海 264209) 摘 要 ：交联酶聚体 (CLEA)是一种新型的无载体固定化技术 。以木瓜蛋 白酶为模型体系，系统地研究了木瓜蛋白酶的提取纯化方 法，固定化制备CLEA的方法 以及游离木瓜蛋 白酶和CLEA的应用条件、稳定性和不同离子对其活力的影响。结果表明，最适催化温度 游离酶为65~C，CLEA最适催化温度为75℃；游离酶最适催化pH值为6．6，CLEA~适催化pH值为7．6；米氏常数Km游离酶为1．25txmolm／L， CLEA为0．441~mol／mL。与游离木瓜蛋 白酶相比，CLEA的米氏常数Km减小，具有耐高温、活性强、稳定性好等特征，能耐受一定pH值 和温度变化，对金属离子不敏感。 关 键 词：木瓜蛋白酶；提取；固定化；交联酶聚体 中图分类号：Q814．2 文献标识码：A 文章编号：0254—5071(2011)07—0105—03 Carrier-freeimmobilizationofpapain ZHANGFengjie，YANGJie，LILifeng，LIWei，ZHUQizhong (MarineCollegeatWeihai,ShandongUniversiO~,Weihai264209,China) Absb~act：Cross-linkedenzymeaggregation(CLEA)isanovelcarrier-fleeimmobilizationtechnique．Inthisstudy，theextractionandpurificationof freepapain，htepreparationofpapain-CLEAandapplicationconditionsofCLEA，htestabilityandinfluenceofdifferentionsonhteactiviytoffree papainweresutdied．Theresults~owedhtathteoptimaltemperature，pHvaluenadhteMichaelisc·onstnat(ran)forfreepapaincaatlysiswere65℃， 6．6valuenad1．251xmol／mL，respectively．Theoptimaltemperature，pHvalueandhteMichaelis—constant(Km)forCLEAcaatlysiswere75℃，7．6nad 0．44txmolm／L，respectively．TheKmofCLEAwaslower，naditcouldresisttohigh—temperatureandhadhigheractivityandgoodstabiliytcompraed wiht htoseofhtefreepapain．Inaddition，itwasnotsensitiveotpHvaluenadtemperaturechangesandmeatlions． Keywords：papain；exrtaction；immobilization；cross—linkedenzymeagrgegation 木瓜蛋白酶 (papain，PA)大量存在于番木瓜 (Carica 1．2 买验方法 papaya)未成熟果实的乳汁中，是一种含巯基 (-SH)的肽链 1．2．1酶的提取和纯化 内切酶。由于木瓜蛋白酶稳定性好，对动植物蛋白、多肽、 取番木瓜乳汁，加入保护剂，经硫酸铵和氯化钠多次 酯、酰胺等具有强的水解能力fI_3】。因而在食品、医药工业中