双酶水解法制备羊胎盘活性肽.docx

3双酶水解法制备羊胎盘活性肽科研 经验朱蓓薇葛瑞宏(大连轻工业学院生物与食品工程学院 ,大连 ,116034)摘 要 采用现代生物酶解技术制备羊胎盘生物活性肽 , 以水解度 ( D H) 和酸溶性肽得率( YASP) 为指标 ,在单酶水解的基础上探索更加有效的新工艺 ———双酶水解工艺 。实验确定 了木瓜蛋白酶 ( Papain) 与胰蛋白酶 ( Tryp sin) 的等活力混合酶为水解羊胎盘的最佳双酶组合 , 其最佳酶解工艺条件为 :p H710 、温度 52 ℃、酶活添加量 3 000 u/ g (料) 、底物浓度 10 % 、水解时 间 3 h ,酶解前最佳热处理条件为沸水浴 15 min 。关键词 羊胎盘 ,活性肽 ,水解度 ,酸溶性肽得率生物活性肽具有独特的理化性与生物活性 ,分子量相对较低 ,不会引起象蛋白质或高 分子肽对人体造成的过敏反应 ,更易于被人 体消化吸收 。近年来 ,已成为国际生命科学 研究的热点之一1 ～7 。胎盘在我国传统医学中被称为紫河车 ,具有益气养血 ,补肾益精之功效8 ～10 。目前 国内外对羊胎盘食品的开发 ,着重于对活性 物质的提取 、应用 ,如羊胎盘全粉 、活性羊胎其他试剂均为 A R 级 。112主要仪器与设备微量凯氏定氮仪 、电动组织捣碎机 、精密 酸度计 、自动电位滴定装置 、722 型分光光度计 、电子恒速搅拌器 、恒温水浴锅 、离心机 、电 子天平等 。113分析检测方法蛋白质含量测定 :微量凯氏定氮法 。 蛋白酶活力测定 : Folin2酚法12 ,13 。 蛋白质水解度 ( D H) :采用 p H2stat 法14素等9 ,11。羊胎盘除自身具有生物活性外 ,其蛋白质含量高达 80 %以上 ,为充分利用羊胎盘资源 ,本研究采用现代生物酶解技术制 备羊胎盘生物活性肽 ,对酶解工艺及其前处 理条件进行了探索 ,提出了更加有效的双酶 组合水解工艺 。进行测定 。D H % = [ 水解断裂的肽键数目 ( h ) / 总 肽键数目 ( h tot ) ] ×100 %酸溶性肽得率 ( YA SP) 15 与氮溶指数( N S I) 16 :均采用 Folin2酚比色法进行测定 。12分子量测定 :凝胶层析法。114工艺方法11411制备羊胎盘匀浆羊胎盘 →洗净 →剪碎 (去除筋膜及血管) →称重→加入适量水进行组织匀浆 →羊胎盘匀浆 ( 冷冻备 用) 。11412酶解工艺将胎盘匀浆加热煮沸 10 min 后 ,调节其 温度及 p H 值至酶作用最适条件 ,加酶水解 ,采用 p H2stat 装置控制反应液 p H 值 ,同时采材料与方法1111 原料与主要试剂羊胎盘 :大连九羊食品有限公司提供 。 胰蛋白酶 ( Tryp sin) ,上海化学试剂厂产品 ;木瓜蛋白酶 ( Papain) 与 As11398 中性蛋白酶 ,产自无锡酶制剂厂 ; 碱性蛋白酶 ( Al2 calase) 、复合蛋白酶 ( Protamex) 、中性蛋白酶 (Neut rase) 和复合风味蛋白酶 ( Flavo urzyme) 为丹麦诺维信 (中国) 公司产品 。第一作者 :博士研究生 ,教授。3 大连市科技攻关项目( No12002B INS078)收稿时间 :2003 - 09 - 2641生产 与科 研 经验食品与发酵工业Vol129 No111Food and Fermentatio n Indust ries用电子恒速搅拌器搅拌 ,以便酶解反应能够均匀 、充分地进行 。反应一定时间后灭酶 ,条分别 选 用 胰 蛋 白 酶、Alcalase 、As11398中性蛋白酶 、木瓜蛋白酶 、Neut rase 、Protamex 和 Flavo urzyme 等 7 种蛋白酶对羊胎盘进行 水解 。各种酶在其最适理论条件下的水解效 果见表 1 。通过对以上 7 种蛋白酶水解羊胎盘的效果比较可以看出 ,胰蛋白酶的水解速度最快 ,件为 90 ℃加热 10 min17解液 ,进行指标测试 。,过滤后得羊胎盘水结果与分析2211单酶的筛选表 1各种蛋白酶对羊胎盘蛋白水解效果的比较酶解条件1)酶的名称YASP/ %NSI/ %酶解液感官评定D H/ % p H 温度/ ℃胰蛋白酶Alcalase Protamex As11398木瓜蛋白酶Neut raseFlavo urzyme淡黄色、混浊 ,腥味重深棕色、混浊 ,腥味重 淡黄色、混浊 ,略带腥味淡黄色、较清 ,略带腥味 淡黄色、混浊 微腥 淡黄色、较清 ,微腥深棕色、混浊 ,略带腥味810810710715710710710455050455550502213217166141841311811188101296129671276